AbMole荧光染料：点亮您的科研成功之路

在这个充满探索与发现的科研时代，每一个细微的细胞活动都蕴藏着生命的奥秘，荧光染料可以标记微观世界中的精细细胞结构和生物大小分子，使生命科学研究变得绚烂多彩，为我们开启了探索之门。AbMole为您介绍荧光染料的发光原理、主要种类和一些热门染料的应用。

一、荧光染料的发光原理

荧光染料是指吸收某一波长的光波后能发射出另一波长大于吸收光光波的物质，它们一般含有若干个芳香族基团，这些基团具有较强的光吸收能力，在吸收激发光能量后，染料分子的内部能量状态显著提升，跃迁至一个不稳定的激发态（S₁’）。由于激发态具有较高的能量水平，它倾向于寻求向更稳定的状态转变。一般有机分子会通过化学键的旋转或振动等机械运动来逐步释放能量，但经过设计的荧光分子会先通过震动进入S₁状态随后直接以光子的形式释放剩余的能量，即发出荧光。AbMole提供高品质抑制剂、细胞因子、人源单抗、天然产物、荧光染料、多肽。

图1 荧光染料的发光原理

二、荧光分子的主要种类

荧光分子主要有香豆素类、花菁类染料、BODIPY类、荧光素和罗丹明类等几种类型。香豆素荧光染料分子量很小，可紫外激发，一般发蓝色荧光，常常作为多色荧光检测实验中的蓝光染料。花菁染料 (Cyanine，简写Cy) 是另一类常见的荧光染料，例如Cy3。花菁的核心结构是两个含氮杂环通过奇数的次甲基连接形成，每增加一个乙烯基团，会使得光谱红移约100nm。荧光素和罗丹明都属于氧杂蒽染料，它们具有极高的亮度，并且其激发和发射波长都位于可见光谱范围内，但是荧光素的pKa值为6.4，因此其光谱特性在很大程度上受环境pH值的影响，这一类荧光分子种类较多，最常见的包括异硫氰酸荧光素（FITC）、羧基荧光素、罗丹明，罗丹明6G、110、123等。二吡咯烷硼化合物，又名BODIPY，因其卓越的光物理特性而备受欢迎。它们具有高量子产率、出色的亮度、窄半峰宽的吸收和发射光谱等优点。BODIPY的各种衍生物覆盖了从绿色（BODIPY FL）到红色（BODIPY 650/665）的大部分可见光谱范围，基于BODIPY的荧光探针目前广泛应用于生物医学和环境科学领域。AbMole是ChemBridge中国区官方指定合作伙伴。

图2 常见荧光染料的化学结构

三、科研常用荧光染料

荧光染料在生命科学和基础医学研究中起到了重要的作用，它们可以染色细胞核、细胞膜和膜性结构、线粒体、溶酶体等，也可以对细胞的状态例如凋亡、活死等进行染色以便于大家分析，下面简单介绍一些科研中常用的荧光染料。AbMole多年持续聚焦生命科学领域荧光染料的开发与生产。

1. 细胞核染色

细胞核染料主要有DAPI和Hoechst系列产品。DAPI的最大激发和发射波长分别为350和460 nm，发蓝色荧光。DAPI无法活染，一般DAPI染色前需要对细胞进行多聚甲醛的固定。Hoechst则可以对活细胞进行染色，一般在延时成像等持续性的荧光观察实验中会用到该产品，其最大激发和发射波长与DAPI相接近。

图3 Hoechst 33342染色效果图

2. 细胞线粒体染色和线粒体膜电位检测

MitoTracker 系列染料可以选择性地积聚在线粒体基质中，通过与半胱氨酸残基的游离硫醇基反应来共价结合线粒体蛋白，从而可以对线粒体进行染色。

线粒体膜电位对于细胞的正常能量代谢和功能维持至关重要，JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψm 的理想荧光探针。在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，可以产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-1则不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体，可以产生绿色荧光，通过流式细胞术、激光扫描共聚焦显微镜等即可对细胞的膜电位进行量化或者定性分析。

图4 JC-1染色效果图

3.活死细胞染色试剂盒：Calcein AM /PI

当需要对细胞的存活和死亡进行分析时，可以使用Calcein AM /PI双重染色法。Calcein-AM可透过细胞膜但其自身并不是荧光分子，通过活细胞内的酯酶作用，Calcein-AM能脱去AM基，产生的Calcein能发出强绿色荧光 (激发: 490 nm，发射: 515 nm)。因此Calcein-AM仅对活细胞染色；而PI无法染色活细胞，只能穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光 (激发: 535 nm，发射: 617 nm)。通过上述两种荧光染料的双重染色即可分辨出细胞群体中死亡和存活的细胞。

图5 活死细胞染色效果图

4. 凋亡检测试剂盒：Annexin V-FITC/PI

细胞在凋亡的早期会发生磷脂酰丝氨酸（PS）的外翻，而Annexin V是一种磷脂结合蛋白，与PS有高度亲和力，利用FITC标记Annexin V孵育细胞即可以检测出早期凋亡的细胞，而用PI则可以检测出已经死亡的细胞。通常该试剂盒被用于凋亡细胞的流式定量。

图6 Annexin V-FITC/PI凋亡检测

5. 活性氧探针DCFH-DA

活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）是机体进行正常有氧代谢的产物，含氧并且性质活泼的一类物质的总称。包含超活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）是机体进行正常有氧代谢的产物，是含氧并且性质活泼的一类物质的总称。因此具有很高的化学反应活性。DCFH-DA具有较强的非极性可以自由进出细胞膜，但当它被胞内的酯酶水解后则无法透过细胞膜，并且在被ROS氧化成DCF后具有荧光发光的能力。

图7 DCFH-DA检测ROS

6. 脂质过氧化物探针

BODIPY C11 581/591可用于检测细胞的脂质过氧化情况。该染料可以插入细胞膜中，如果在细胞膜中发生氧化，则该染料的多不饱和丁二烯基部分的荧光发射峰从590 nm移动到510 nm，发绿色荧光。而在还原状态下，BODIPY C11 581/591 十一烷酸的激发和发射最大值为 581/591 nm，发红色荧光。目前，该染料是铁死亡研究的常用产品。

在生命科学研究领域中，荧光染料扮演着重要的角色，AbMole为您推荐：

产品名称	目录号	Ex/Em· 颜色	产品描述
LysoTracker Red	M21524	577/590 nm 红色	溶酶体标记
PKH-26 (red)	M21701	551/567 nm 黄色	外泌体及细胞标记
Nile Red	M5118	543/598 nm 红色	可用于脂类及蛋白质等的染色
2-NBDG	M6327	488/542 nm 黄色	示踪葡萄糖的摄取和代谢
MitoSOX Red	M19992	510/580 nm 红色	线粒体标记
MitoTracker Red CMXRos	M19979	579/599 nm 红色	线粒体标记
Rhodamine 123	M11522	508/530 nm 绿色	线粒体标记
TMRE	M9743	550/576 nm 黄色	线粒体标记
DiOC6(3) iodide	M11521	484/500 nm 绿色	线粒体膜电位检测
TMRM Perchlorate	M9542	550/576 nm 黄色	线粒体膜电位检测
Green DND-26	M45073	504/511 nm 绿色	溶酶体标记
ER-Tracker Green	M55398	504/511 nm 绿色	内质网标记
ER-Tracker Red	M45074	587/615 nm 红色	内质网标记
Phalloidin-TRITC	M51704	550/570 nm 红色	F-actin蛋白标记
Phalloidin-iFluor 488 Conjugate	M21689	491/516 nm 绿色	F-actin蛋白标记
Calcein-AM	M5114	490/515 nm 绿色	活细胞标记
Fluorescein diacetate (FDA)	M5115	488/530 nm 绿色	活细胞标记
Propidium Iodide	M5108	535/615 nm 红色	细胞凋亡和坏死检测
CFDA-SE	M5117	500/520 nm 绿色	细胞增殖检测
BODIPY 493/503	M9850	493/503 nm 绿色	脂质染色
DiR	M5122	748/780 nm 红外	细胞膜和膜性结构染色
DiI	M5120	549/565 nm 黄色	细胞膜和膜性结构染色
FM1-43	M54634	510/626 nm 红色	细胞膜和膜性结构染色
FM4-64	M28704	558/734 nm 红外	细胞膜和膜性结构染色
ABDA	M31290	测400 nm吸光度	单线态氧检测
Dihydroethidium	M9696	可变（氧化前370/420 nm；氧化后300/610 nm）	超氧化物阴离子检测
Hydroethidine	M40970	520/600 nm 红色	过氧化物及细胞缺氧检测
FerroOrange	M42835	543/580 nm 橙色	亚铁离子检测
FeRhoNox-1 (Fe2+ indicator)	M21552	540/570 nm 黄色	亚铁离子检测
Fura-2 AM	M9807	336/505 nm 绿色	钙离子检测
Fluo-3 AM	M9960	488/526 nm 绿色	钙离子检测
Rhod-2 AM	M10357	552/581 nm 黄色	钙离子检测
Zinquin	M55292	355/491 nm 蓝色	锌离子探针
Zinpyr-1	M29845	可变（507-515/513-558 nm）	锌离子探针
MQAE	M13793	350/460 nm 蓝色	氯离子探针
BCECF-AM	M9520	488/535 nm 绿色	胞内pH检测
IR808	M11151	782/808 nm 红外	产生ROS并可在肿瘤部位积累和成像
Fluorescein Sodium	M10272	490/530 nm 绿色	造影剂
D-Luciferin potassium salt	M8873	化学发光，检测波长560 nm 黄色	活体成像
AkaLumine	M13768	化学发光，检测波长675 nm 近红外	荧光素类似物，可被荧光蛋白降解并发光
Indocyanine green	M3577	785/813 nm红外	活体成像
CY5-SE	M13775	640/670 nm 红外	体内外生物大分子标记
ICG-OSu	M21459	789/814 nm 近红外	体内外生物大分子标记
Acridine Orange	M6404	488/520 nm绿色	核DNA和RNA染色
FITC-Dextran	M43972	495/525 nm 绿色	生物物质示踪
Coelenterazine	M9267	Ex&Em 颜色	超氧阴离子及过氧亚硝酸盐检测

AbMole荧光染料：点亮您的科研成功之路

一、荧光染料的发光原理

二、荧光分子的主要种类

三、科研常用荧光染料

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