Fluorescein Sodium  别名：荧光素钠

Fluorescein Sodium（荧光素钠）是一种橙色水溶性荧光染料（Fluorescent Dye），是一种进行FFA所用的造影剂。

重要应用：
1、水溶性荧光染料，因其小分子半径（Stokes-Einstein radius = 0.45 nm），常用在通透性和血管灌注研究；
2、啮齿类（大小鼠）模型，用作荧光示踪剂，研究血脑屏障（BBB）通透性和血-脊髓屏障（BSCB）通透性；
3、肝细胞有机阴离子转运多肽（OAPT）介导的药物转运研究中，荧光素钠（NaFl）用作探针底物（Probe substrate）；
4、光漂白后的荧光恢复（FRAP）技术中使用荧光素钠（NaFl），原位监测溶质运输进入骨骼情况。

血脑屏障（BBB）研究背景简介：
1、基本概念
血脑屏障是存在于脑组织与血液之间的一个复杂的细胞系统，能控制血液循环中某些物质向中枢神经组织转运，从而保证中枢神经系统（CNS）内环境的稳定。由脑微血管内皮细胞（BMEC），基膜和星形胶质细胞（AC）组成。限制血液中的成分自由出入脑组织，通过选择性通透作用维持中枢神经系统内环境的稳定和神经元的正常功能。
2、研究意义
A）对BBB结构、发展、生理和病理特征进行更多细节研究；B）病理条件下BBB功能研究，特别是血管源性脑水肿，伴随细胞毒性（细胞）水肿，致命性颅内压增高的最常见诱因；
3、研究方法
体外血脑屏障（BBB）模型中最常用方法是使用静脉注射的活体染料（示踪剂，探针），分子量大于180Da，可排除在外不能穿透完整脑屏障。满足此要求最小分子量探针是荧光素钠盐（NaFI，分子量：376Da），最大分子量是伊文斯蓝（EB，分子量：961Da）。

Fluorescein sodium（荧光素钠盐）动物实验（整理自公开文献，仅供参考）：

文献 1：《Effects of peripheral inflammation on the blood-spinal cord barrier》
实验目的 ：研究外周炎症对血脊髓屏障的影响，检测在内植 carrageenan（卡拉胶）和 capsaicin（辣椒素）后血脊髓屏障的变化，包括 occludin 蛋白的改变、免疫球蛋白 G（IgG）的积累以及荧光染料的渗透情况，并探讨性别差异。
实验动物信息 ：使用 175-250 克的成年Sprague-Dawley 大鼠，包括雄性和雌性。
Fluorescein sodium 溶解配制方法 ：未明确提及具体的溶解和配制过程，但提及通过静脉注射荧光染料。
给药方法、剂量 ：通过尾静脉注射荧光染料，包括 Evans Blue（3% 溶液，4 mL/kg）和钠 fluorescein（10% 溶液，2 mL/kg），给药后保持动物在吸入麻醉下循环至少 30 分钟。
检测方法 ：处死动物后，取腰骶部、胸段、颈段脊髓、中脑和大脑皮层组织，称重后，用三氯乙酸提取组织中的染料，通过分光光度计在特定波长下测量荧光强度，从而确定染料的浓度。
检测结果及分析 ：在 carrageenan 炎症后 72 小时，雄性和雌性大鼠的腰骶部脊髓中检测到显著的 IgG 积累，但在该时间点未检测到外源性小分子荧光染料 Evans Blue 或钠 fluorescein 的渗漏。这表明 carrageenan 炎症可引起紧密连接蛋白 occludin 形态改变和 IgG 积累，但这些变化可能并不表明血脊髓屏障的完全破坏，而是一种短暂的病理改变，可能随着炎症的消退而逆转。

文献 2：《Involvement of central histaminergic and cholinergic systems in the morphine-induced increase in blood-brain barrier permeability to sodium fluorescein in mice》
实验目的 ：研究吗啡诱导的血脑屏障对钠 fluorescein 通透性增加的机制，探讨中枢组胺能和胆碱能系统在其中的作用。
实验动物信息 ：使用 30-35 克的雄性 ddY 小鼠。
Fluorescein sodium 溶解配制方法 ：未明确提及具体的溶解和配制过程，但提及通过尾静脉注射 40 mg/kg 的钠 fluorescein。
给药方法、剂量 ：小鼠通过尾静脉注射钠 fluorescein（40 mg/kg），注射后 30 分钟处死小鼠。
检测方法 ：将小鼠大脑立即用 30 mL 生理盐水从左心室灌注至主动脉，然后将大脑匀浆于 0.5 M 硼酸盐缓冲液（pH 10）中，通过荧光光度法测定钠 fluorescein 水平。
检测结果及分析 ：吗啡（5 mg/kg，皮下注射）可使小鼠大脑中钠 fluorescein 水平显著增加。H2 受体拮抗剂（如西米替丁和雷尼替丁）通过脑室内给药可显著抑制吗啡的这种作用，而 H1 受体拮抗剂（如苯海拉明和苯吡胺）则无显著影响。组胺合成抑制剂（如 a- 氟甲基组氨酸）和抗胆碱药（如阿托品和比哌立定）也可显著减少吗啡的作用。这表明吗啡激活脑内 H2 受体和胆碱能受体（通过乙酰胆碱）可能参与了其诱导的血脑屏障对钠 fluorescein 通透性的增加。

文献 3：《Altered Blood-Brain Barrier Permeability and Its Effect on the Distribution of Evans Blue and Sodium Fluorescein in the Rat Brain Applied by Intracarotid Injection》
实验目的 ：研究大鼠脑血屏障通透性变化对 Evans Blue 和 Sodium Fluorescein 在脑内分布的影响。
实验动物信息 ：使用 400-450 克的成年 Wistar 大鼠。
Fluorescein sodium 溶解配制方法 ：未明确提及具体的溶解和配制过程，但提及通过颈内动脉注射 10% 的 Sodium Fluorescein。
给药方法、剂量 ：将大鼠分为六组，分别在不同条件下（BBB 完整、osmotically 开放的 BBB、细胞水肿诱导的 BBB 改变）通过颈内动脉注射 Evans Blue（2% 溶液，2 mL/kg）和 Sodium Fluorescein（10% 溶液，0.6 mL/kg）。
检测方法 ：在注射后 20-30 分钟，通过经心脏灌注 4% 的多聚甲醛溶液固定大脑，然后将大脑切成 30 微米厚的冠状切片，在荧光显微镜下观察染料的分布情况，并使用三度标尺（1-3 度）对染色强度进行评级，同时计算每个估计区域内细胞内 / 细胞外染料分布的比例。
检测结果及分析 ：在 BBB 完整的情况下，注射 Evans Blue 和 Sodium Fluorescein 后，大脑靶组织有较弱的染色；在 mannitol 开放 BBB 后，染料在细胞内的分布显著增加；在诱导细胞水肿的大鼠中，与 BBB 完整的大鼠相比，Sodium Fluorescein 的分布显示出更多的细胞内成分，表明细胞水肿增加了 BBB 的通透性，使水溶性染料能够进入细胞内。

文献 4：《Effects of perfusion rate on permeability of frog and rat mesenteric microvessels to sodium fluorescein》
实验目的 ：确定单个肠系膜毛细血管和静脉对小分子水溶性物质的通透性是否随血流速度变化而变化，以探索微血管通透性与血流速度之间的关系。
实验动物信息 ：使用雄性青蛙（Rana temporaria，6-7.5 厘米长）和年轻 Sprague-Dawley 大鼠（100 克）。
Fluorescein sodium 溶解配制方法 ：荧光灌注液在牛血清白蛋白（BSA）浓度为 10 mg/ml 的类似林格溶液中添加钠 fluorescein（0.1 或 0.4 mg/ml），溶液当天新鲜配制，以避免与白蛋白结合。
给药方法、剂量 ：通过双筒灌注玻璃毛细管向青蛙和大鼠的肠系膜微血管中灌注含钠 fluorescein 的溶液，灌注速度在 400 至 2000-10000 微米 / 秒范围内变化。
检测方法 ：利用立体显微镜配备荧光附件和 CCD 摄像机，观察微血管及其周围组织的荧光强度变化，通过特定软件分析荧光光强度随时间的变化，计算出钠 fluorescein 的通透性（PS）。
检测结果及分析 ：在青蛙和大鼠的微血管中，PS 随灌注速度（U）线性增加。在 20 个青蛙毛细血管中，PS 平均值与 U 的关系为 PS = 9.35×10^-5 U + 0.244；在 9 个大鼠静脉中，PS 平均值与 U 的关系为 PS = 1.62×10^-4 U + 0.375。使用硝酸甘油合酶抑制剂（如 L-NNA）处理大鼠静脉或使用去甲肾上腺素处理青蛙毛细血管，可可逆地消除 PS 的血流依赖性成分。研究表明，微血管通透性的血流依赖性变化可能主要与血管壁上约 0.8 纳米半径的孔隙开放和关闭有关，这些孔隙主要限制小分子水溶性物质的通透性，对净流体交换影响较小。