DiR iodide  别名：DiIC18(7); Cy7 DiC18; DiR细胞膜荧光探针

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色，这类染料在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。它们的荧光颜色区分明显：DiI(橙色荧光)，DiO(绿色荧光)，DiD(红色荧光)和 DiR (深红色荧光)这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DiR在活体成像或者示踪中非常有用，因为它们所发射的红外光可以高效地穿过细胞和组织，并且在红外光范围内，其本底荧光水平很低。

使用方法：
1. DiR细胞膜染色液制备
(1)配置DMSO或EtOH 储存液：储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。
注意：未使用的储存液保存在-20 °C，避免反复冻融。
(2)工作液制备：用合适的缓冲液(如：无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为1～5 µM的工作液。
注意：工作液的最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找最佳条件。

2. 悬浮细胞染色
(1)悬浮细胞密度为 1 × 10⁶/mL加入到工作液中。
(2)在37 ℃培养细胞 2～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。
(3)染色细胞试管在1000～1500转离心5分钟。
(4)倾倒上清液，再次缓慢加入预温37℃的培养液。
(5)重复(3)，(4)步骤两次以上。

3. 粘壁细胞的染色
(1)使粘壁的细胞在无菌实验室培养。
(2)从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4)在37 ℃培养细胞 2～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。
(5)吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，培养5～10分钟，然后吸干培养基。

4. 流式细胞仪的检测
DiR染色的细胞可以用经典的FL4流式细胞仪检测。