ER-Tracker Red是一种荧光染料,能与内质网高选择性结合,在低浓度下对细胞无毒性,具有荧光寿命高,消光系数好等特点。ER-Tracker 不适合对固定后细胞进行染色。Em: 615 nm,Ex: 587 nm。
分子量 | 915.23 |
分子式 | C44H42BClF2N6O7S2 |
性状 | Solid |
溶解性 | DMSO 10 mg/mL |
储存条件 | -20°C, protect from light |
运输方式 | 冰袋运输,根据产品的不同,可能会有相应调整。 |
ER-Tracker Red是一种荧光染料,能与内质网高选择性结合,在低浓度下对细胞无毒性,具有荧光寿命高,消光系数好等特点。ER-Tracker 不适合对固定后细胞进行染色。Em: 615 nm,Ex: 587 nm。
使用说明(仅供参考,请根据实验需求进行相应调整):
一、ER-Tracker Red工作液的配制:
1. 取少量ER-Tracker Red按照1:1000的比例加入到ER-Tracker Red 稀释液中。例如取1μl ER-Tracker Red加入到1ml ER-Tracker Red 稀释液中。混匀后即为ER-Tracker Red工作液。
2. ER-Tracker Red工作液使用前需37℃预温育。
注:工作液中ER-Tracker Red的浓度可以根据实际情况进行适当调整,推荐的稀释比例调整范围为1:1000-1:3000。为降低背景,在染色效果可以接受的范围内,建议尽量使用较低浓度的ER-Tracker Red。
二、内质网的荧光标记:
1. 去除细胞培养液,用适量的溶液如HBSS with Ca2+ & Mg2+ (Hanks' Balanced Salt Solution with Ca2+ & Mg2+)洗涤生长在盖玻片上的细胞。注:HBSS with Ca2+ & Mg2+ (C0219)可以向碧云天订购;对于悬浮细胞的染色可以参考贴壁细胞的染色方法进行。
2. 去除洗涤液,加入步骤1配制好的并37℃预温育的ER-Tracker Red染色工作液,与细胞37℃共孵育15-30分钟。
3. 去除ER-Tracker Red染色工作液,用细胞培养液洗涤细胞1-2次。
4. 随后通常用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜进行观察。此时可观察到内质网呈明亮的强荧光染色。
5. 如果经ER-Tracker Red染色后的细胞需要进行固定,可以使用4%甲醛37℃固定2分钟。固定后用适当的洗涤液洗涤2-3次,每次5分钟,随后可以进行复染或滴加适当的抗荧光淬灭封片液,最后封片观察。
注意:ER-Tracker Red染色的细胞不能用Triton X-100通透,Triton X-100通透处理会导致ER-Tracker Red的荧光染色消失。
下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前,需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。
浓度/溶剂体积/质量 | 1 mg | 5 mg | 10 mg |
---|---|---|---|
1 mM | 1.0926 mL | 5.4631 mL | 10.9262 mL |
5 mM | 0.2185 mL | 1.0926 mL | 2.1852 mL |
10 mM | 0.1093 mL | 0.5463 mL | 1.0926 mL |
*吸湿的DMSO对产品的溶解度有显著影响,请使用新开封的DMSO;
请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。
建议您制定动物给药及实验方案时,尽量参考已发表的相关实验文献(溶剂种类及配比众多,简单地溶解目的化合物,并不能解决动物给药依从性、体内生物利用度、组织分布等相关问题,未必能保证目的化合物在动物体内充分发挥生物学效用)。
体内实验的工作液,建议您现用现配,当天使用;如在配制过程中出现沉淀、析出现象,可以通过超声和(或)加热的方式助溶。
切勿一次性将产品全部溶解。
请在下面的计算器中,输入您的动物实验相关数据并点击计算,即可得到该实验的总需药量和工作液终浓度。
例如您给药剂量是10 mg/kg,平均每只动物的体重为20 g,每只动物的给药体积是100 μL,动物数量为20只,则该动物实验的总需药量为4 mg,工作液终浓度为2 mg/mL。
1:鉴于实验过程的损耗,建议您至少多配1-2只动物的量;
2:为该产品最终给药时的浓度。
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