AbMole蛋白酶抑制剂Cocktail(不含EDTA,100X DMSO储液)是一种低毒,全面的蛋白保护试剂,最大限度地保护蛋白免受蛋白酶降解,提高蛋白得率。本品可用于蛋白免疫印迹 (WB)、免疫共沉淀 (Co-IP)、pull-down、免疫沉淀 (IP)、免疫组织化学 (IHC)、免疫荧光 (IF)、酶学研究等多种与蛋白相关的实验。
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产品优势:
组分清晰:6种抑制剂按照固定浓度配比。
稳定高效:保留蛋白质的完整性,产出率较高。
物美价廉:质量保障同时,价格合理,为您节省研究开支。
实验数据:
产品描述:
本产品是由 6 种独立的蛋白酶抑制剂(不含 EDTA): AEBSF、Aprotinin、 Leupeptin 、Bestatin、E-64、Pepstatin A 按照优化的配比配置而成的蛋白酶抑制剂混合物。其作用的靶点分别为丝氨酸蛋白酶,丝氨酸半胱氨酸蛋白酶,氨肽酶,半胱氨酸蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶等,广泛作用于各种蛋白酶,可称之为广谱蛋白酶抑制剂。
使用方法:
1. 本产品适用于哺乳动物细胞及组织的蛋白质提取及纯化,蛋白免疫印迹(Western Blot),免疫共沉(Co-IP),免疫荧光(IF) ,免疫组织化学(IHC),激酶测定(kinase assay)和抗体、酶诊断试剂盒(DigKit)等。
2. 实验时,按照 1:100 的容积比,将 Cocktail 预先加入在已准备好的实验体系中, 轻轻混合均匀。
保存条件:
本产品应于-20℃环境下密封保存,产品有效期为 2 年。使用时可短时间放置于常温或 4℃中,用毕应立即放回-20℃中保存。
注意事项:
1. 本产品不含 EDTA, 为 100× DMSO 储存液形式。使用时应调整 Cocktail 浓度为 1×,若有蛋白酶含量丰富的细胞或组织,可适当增加 Cocktail 在实验体系中的浓度。
2. 本产品置于-20℃保存时,DMSO 呈现冰晶状态,此属于正常现象,非产品质量问题。
3. 本产品仅供科研使用。
常见问题解答:
1. 蛋白酶抑制剂Cocktail有哪些优势?
回答:针对多种氨基酸的靶点,对目的蛋白进行全方位的保护,使其免受内源性蛋白酶的降解,蛋白的得出率较高,大大提高实验效率。
2. 可以配合细胞裂解液一起使用吗?
回答:可以,这样可以充分的裂解细胞或组织中的蛋白,有效降低蛋白质的降解。
3. 为什么需要用DMSO溶解?可否换成其他溶剂?
回答:蛋白酶抑制剂Cocktail较易溶解于DMSO,且DMSO通常不会影响实验结果,而且性质稳定,利于保存和运输。因此暂不考虑其他溶剂。
4. 实验时误将其放置常温下,会不会造成试剂变质?
回答:短时间放置于常温下是可以的,不会造成试剂变质,因为蛋白酶抑制剂通常比较稳定。如果实验需要在常温下进行,建议将其置于冰块操作,用毕后迅速放置-20℃保存。同时应尽量避免反复冻融。
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建议您制定动物给药及实验方案时,尽量参考已发表的相关实验文献(溶剂种类及配比众多,简单地溶解目的化合物,并不能解决动物给药依从性、体内生物利用度、组织分布等相关问题,未必能保证目的化合物在动物体内充分发挥生物学效用)。
体内实验的工作液,建议您现用现配,当天使用;如在配制过程中出现沉淀、析出现象,可以通过超声和(或)加热的方式助溶。
切勿一次性将产品全部溶解。
请在下面的计算器中,输入您的动物实验相关数据并点击计算,即可得到该实验的总需药量和工作液终浓度。
例如您给药剂量是10 mg/kg,平均每只动物的体重为20 g,每只动物的给药体积是100 μL,动物数量为20只,则该动物实验的总需药量为4 mg,工作液终浓度为2 mg/mL。
1:鉴于实验过程的损耗,建议您至少多配1-2只动物的量;
2:为该产品最终给药时的浓度。
1. 为什么蛋白质降解会成为WB实验的“绊脚石”?
在细胞裂解或组织提取过程中,原本隐藏在各种细胞器中的蛋白酶可能会被激活,从而导致蛋白质降解。这种降解不仅会破坏目标蛋白的完整性,还会影响后续的检测效果。例如,目标蛋白可能因为降解而无法被抗体特异性识别,或者在电泳过程中出现多条降解条带,干扰实验结果的解读。因此,从样本处理的第一步开始,防止蛋白质降解就显得至关重要。
2. AbMole蛋白酶抑制剂Cocktail(Protease Inhibitor Cocktail,M5293):全方位守护蛋白完整性
AbMole的蛋白酶抑制剂Cocktail(M5293)是一款含有多款抑制剂的复合物,它包含了多种高效、特异性的蛋白酶抑制剂,由AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Bestatin、E-64、Pepstatin-A等6种不同的蛋白酶抑制剂优化配比配置而成,相较于传统的由单一组分构成的蛋白酶抑制剂如PMSF,能够更加广泛地抑制丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等多种常见蛋白酶的活性。这种全方位的保护机制,从样本提取的那一刻起,就为您的目标蛋白提供了坚实的防护。另外一方面,PMSF具有一定的毒性和腐蚀性且半衰期较短。而AbMole的蛋白酶抑制剂Cocktai(M5293)则具有低毒和较强的稳定性,可有效解决大家使用PMSF时的担忧。AbMole的蛋白酶抑制剂Cocktai(Protease Inhibitor Cocktail,M5293)除了用于WB实验以外,还能为免疫共沉淀 (Co-IP)、pull-down、免疫沉淀 (IP)、免疫组织化学 (IHC)、免疫荧光 (IF)、酶学研究等多种实验中的蛋白提供保护。
图1. AbMole的蛋白酶抑制剂Cocktail(M5293)可有效保护目的蛋白不受蛋白酶的降解。
3. 范例详解
案例1. J Exp Clin Cancer Res. 2023 Jun 28;42(1):155
研究人员利用WB实验、代谢组学分析等技术筛选与PDAC肝转移有关的关键代谢物。实验中使用了来自AbMole的两个爆款产品,即蛋白酶抑制剂Cocktai (M5293)和磷酸酶抑制剂Cocktail(M7528)对蛋白进行保护,两款抑制剂有效避免了蛋白的降解并保护蛋白的磷酸化状态。
图2. 使用来自AbMole的蛋白酶抑制剂Cocktail(M5293)为WB实验提供保护[1]
案例2. Advanced science 12(12) (2025) e2411719
研究人员发现FDFT1在肝细胞癌(HCC)中的表达与胆固醇和胆汁酸水平的变化相关,并通过HNF4A/ALDOB/AKT1轴影响HCC的进展。在研究FDFT1的功能时,实验人员使用来自AbMole的蛋白酶抑制剂Cocktail(M5293)为动物组织的蛋白提取提供保护。
图3. AbMole的蛋白酶抑制剂Cocktail(M5293)(为动物组织WB实验中的蛋白提供保护[2]。
案例3. Cell death & disease 11(10) (2020) 902
科研人员研究了miR-30a-5p/CLCF1轴在肝细胞癌(HCC)中的Sorafenib耐受性和有氧糖酵解中的作用。在验证CLCF1的敲低以及对下游信号蛋白的影响时,实验人员使用了AbMole的蛋白酶抑制剂Cocktail(Protease Inhibitor Cocktail,M5293)为蛋白提供保护。
图4. 由AbMole提供的蛋白酶抑制剂Cocktail(M5293)为WB实验提供保护,以验证CLCF1的敲低[3]
参考文献及鸣谢
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