Calcein-AM 别名：Calcein acetoxymethyl ester; 钙黄绿素乙酰甲酯
Calcein-AM（钙黄绿素乙酰甲酯）是一种具有细胞渗透性的可用于细胞活力检测的荧光染料。Calcein-AM本身是一种非荧光的疏水性化合物，在进入细胞后，可被细胞内的酯酶水解，生成具有强绿色荧光的极性分子 Calcein（钙黄绿素，最大激发波长490 nm，发射波长为 515 nm），因Calcein带较强负电荷，因此滞留在胞内。由于死细胞缺乏活性酯酶，因此仅有活细胞会发出绿色荧光。Calcein常与PI（M5109）联用，分别进行活细胞和死细胞的染色。Calcein-AM可以用于二维、三维培养细胞以及类器官中的活细胞染色。
CAS No.：148504-34-1
ACS Biomater Sci Eng. 2024 May 13;10(5):2995-3005.
J Leukoc Biol. 2024 Sep 03.
Chemical Engineering Journal. 2023 Dec 15;147407.
Applied Materials Today. 2023 May 14.
AMACS Appl Mater Interfaces. 2022 Feb 2;14(4):5033-5052.
new journal of chemistry. 2022 Nov 24;47, 628.
Nat Commun. 2020 Dec 22;11(1):6438.
MaTAR25 lncRNA regulates the Tensin1 gene to impact breast cancer progression
化学性质/溶解性/储存
| 分子量 | 994.86 |
| 分子式 | C46H46N2O23 |
| CAS号 | 148504-34-1 |
| 中文名称 | 钙黄绿素乙酰甲酯 |
| 溶解性（仅列举部分溶剂） | DMSO ≥ 6 mg/mL |
| 储存条件 | -20°C, protect from light, dry, sealed |
| 运输方式 | 冰袋运输，根据产品的不同，可能会有相应调整。 |
*不同实验中用到的溶剂可能不同，具体实验所需溶剂及溶解方法请参考相关文献描述。
生物活性
Calcein, AM是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，它穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成Calcein，从而被滞留在细胞内，发出强绿色荧光。与其它同类试剂(如BCECF, AM和CFDA)相比，Calcein, AM的细胞毒性很低。Calcein的激发和发射波长分别为490 nm和515 nm。
Calcein, AM仅对活细胞染色。作为核染色染料的PI不能穿过活细胞的细胞膜，它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光(激发：535 nm，发射：617 nm)，因此PI仅对死细胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用545 nm激发，仅可观察到死细胞。根据以上特点，Calcein, AM和PI经常被结合用来作为活细胞和死细胞的双重染色。
由于不同细胞系的最佳染色条件不同，我们建议个别确定Calcein, AM和PI的合适浓度。
产品使用参考手册
使用方法（仅供参考）
Analysis of Intracellular Iron Ion.
Calcein-AM (M5114, Abmole Bioscience Inc., USA) dye was used to analyze the release of intracellular iron ions. Calcein-AM is catalyzed by esterases into calcein, which can chelate iron ions, causing fluorescence quenching. The T1F-transfected HEK293T cells are incubated by calcein-AM with a final concentration of 500 nM for 20 min at 37 °C. Then, cells were washed three times and incubated in 1.5 mL of CIB for 30 min at 37 °C. The fluorescence signals of calcein and mCherry were first acquired in LSCM without magnetic stimulation (calcein: Ex/Em = 488/525 nm; mCherry: Ex/Em = 587/610 nm). After applying the AMF (518 kHz, 16 kA/m) for 10 min, the two fluorescence signals were obtained again. The effect of the iron chelator pyridoxal isonicotinoyl hydrazone (PIH) (M14758, Abmole Bioscience Inc., USA) on the intracellular iron ion was also detected.
The fluorescence intensities of calcein and mCherry in the target cells were analyzed by ImageJ software. All cells that we analyzed were those that expressed the red fluorescence protein mCherry. The calcein fluorescence intensity in the obtained image was measured by using the button “measure” in the “Analyze” toolbar of ImageJ software. The average value of calcein fluorescence measured before applying AMF was taken as F0. ΔF is calculated as the fluorescence intensity of calcein after applying the AMF minus F0. The changes of calcein signals for the intracellular iron ion level were calculated to be ΔF divided by F0 (ΔF/F0). The changes of mCherry signals were also processed in the same way.
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/38654432/
实验参考
下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前，需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。
| 浓度/溶剂体积/质量 | 1 mg | 5 mg | 10 mg |
|---|---|---|---|
| 1 mM | 1.0052 mL | 5.0258 mL | 10.0517 mL |
| 5 mM | 0.201 mL | 1.0052 mL | 2.0103 mL |
| 10 mM | 0.1005 mL | 0.5026 mL | 1.0052 mL |
*吸湿的DMSO对产品的溶解度有显著影响，请使用新开封的DMSO；
请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
建议您制定动物给药及实验方案时，尽量参考已发表的相关实验文献（溶剂种类及配比众多，简单地溶解目的化合物，并不能解决动物给药依从性、体内生物利用度、组织分布等相关问题，未必能保证目的化合物在动物体内充分发挥生物学效用）。
体内实验的工作液，建议您现用现配，当天使用；如在配制过程中出现沉淀、析出现象，可以通过超声和（或）加热的方式助溶。
切勿一次性将产品全部溶解。
请在下面的计算器中，输入您的动物实验相关数据并点击计算，即可得到该实验的总需药量和工作液终浓度。
例如您给药剂量是10 mg/kg，平均每只动物的体重为20 g，每只动物的给药体积是100 μL，动物数量为20只，则该动物实验的总需药量为4 mg，工作液终浓度为2 mg/mL。
1：鉴于实验过程的损耗，建议您至少多配1-2只动物的量；
2：为该产品最终给药时的浓度。
延伸阅读 （仅做信息扩展，不作实验参考）
检测原理
Calcein-AM/PI活死细胞双染试剂盒（AbMole，M55257）内含有Calcein-AM和Propidium Iodide（PI，碘化丙啶），Calcein AM 是在传统的钙黄绿素（Calcein）上添加了乙酰甲氧基甲酯即（AM）基团，导致其具有较强的疏水性，因此容易穿过细胞膜进入胞内。Calcein AM本身无荧光，在进入细胞后被细胞中内源性酯酶水解，生成具有强负电荷且不能通过细胞膜的极性分子Calcein并滞留在细胞内，而Calcein可发出强绿色荧光（Ex/Em= 494nm/517nm）[1]。由于死细胞缺乏上酯酶，不能或很少能产生Calcein，因此仅活细胞会被染色为强绿色荧光，死细胞不能被染色。PI则是一种无法透过活细胞膜的染料，由于死细胞的细胞膜选择透过性丧失，PI可以进入胞内与双链DNA特异性结合产生强烈的红色荧光（Ex/Em=535nm/617nm），从而对死细胞进行标记[2]。因此，上述两种染料的联合使用，可以对活细胞与死细胞同时进行双重荧光染色，用于细胞活性或细胞毒性实验的检测。用490nm激发时可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞；而用545nm激发时仅可观察到死细胞。2014年，AbMole的两款抑制剂分别被西班牙国家心血管研究中心和美国哥伦比亚大学用于动物体内实验，相关科研成果发表于顶刊 Nature 和 Nature Medicine。
图1. 活死细胞染色试剂盒的检测原理
二、产品优势
AbMole的Calcein-AM/PI活死细胞双染试剂盒（AbMole，M55257）具有多种优势，主要包括以下几点：
1. 快速检测：操作简单，染色过程仅需40分钟左右，无需复杂的前处理步骤，大大节省了实验时间。
2. 高灵敏度：Calcein-AM和PI的荧光信号清晰明亮，能够准确区分活细胞和死细胞，即使在细胞密度较低的情况下也能获得可靠的检测结果。
3. 广泛适用性：适用于多种细胞类型，包括贴壁细胞、消化后的悬浮细胞以及原代细胞，不受细胞种类限制。对设备要求较低，普通荧光显微镜或者使用酶标仪即可完成检测，降低了实验成本。
4. 稳定可靠：试剂稳定性高，荧光信号持久，不易淬灭，使实验结果具有重复性和可靠性。
三、范例详解
研究者们开发了一种无载体的“特洛伊木马”直径可变金属-有机纳米诊疗剂，通过配位驱动的超分子顺序共组装抗肿瘤抑制剂PEM、过渡金属离子（FeIII）和血管生成抑制剂假辣木酸B（PAB）。该纳米制剂可有效抑制肿瘤血管的生成。在细胞实验中，科研人员使用了由AbMole提供的Calcein-AM/PI活死细胞双染试剂盒（AbMole，M55257）检测HeLa、HTdMEC 和 HUVEC 细胞的细胞活力[3]。
图2. Fluorescence images of live/dead staining assay of HeLa and HTdMEC cells cultured with different formulations[3].
参考文献及鸣谢
[1] HOLLó Z, HOMOLYA L, DAVIS C W, et al. Calcein accumulation as a fluorometric functional assay of the multidrug transporter [J]. Biochimica et biophysica acta, 1994, 1191(2): 384-8.
[2] NICOLETTI I, MIGLIORATI G, PAGLIACCI M C, et al. A rapid and simple method for measuring thymocyte apoptosis by propidium iodide staining and flow cytometry [J]. Journal of immunological methods, 1991, 139(2): 271-9.
[3] FAN Z, SHI D, ZUO W, et al. Trojan-Horse Diameter-Reducible Nanotheranostics for Macroscopic/Microscopic Imaging-Monitored Chemo-Antiangiogenic Therapy [J]. ACS applied materials & interfaces, 2022, 14(4): 5033-52.
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参考文献
以上参考文献由AI整理，仅供参考，AbMole 尚未独立确认这些文献的准确性。
