Green DND-26 (同LysoTracker Green DND-26) 是一种溶酶体(lysosome)绿色荧光探针,能通透细胞膜,可以用于活细胞溶酶体特异性荧光染色。Green DND-26 采用DND-26进行了荧光标记的带有弱碱性的荧光探针,其中仅弱碱可部分提供质子,以维持pH在中性,可以选择性地滞留在偏酸性的溶酶体中,从而实现对于溶酶体的特异性荧光标记。Green DND-26 适用于活细胞染色,但不适合用于固定后细胞的染色。其最大激发光波长为504nm,最大发射光波长为511nm。
| 分子量 | 362.23 |
| 分子式 | C18H25BF2N4O |
| CAS号 | 220524-71-0 |
| 性状 | Solid |
| 中文名称 | 溶酶体绿色荧光探针 |
| 溶解性(仅列举部分溶剂) | DMSO 100 mg/mL |
| 储存条件 | -20℃, protect from light |
| 运输方式 | 冰袋运输,根据产品的不同,可能会有相应调整。 |
*不同实验中用到的溶剂可能不同,具体实验所需溶剂及溶解方法请参考相关文献描述。
Green DND-26 (同LysoTracker Green DND-26) 是一种溶酶体(lysosome)绿色荧光探针,能通透细胞膜,可以用于活细胞溶酶体特异性荧光染色。Green DND-26 采用DND-26进行了荧光标记的带有弱碱性的荧光探针,其中仅弱碱可部分提供质子,以维持pH在中性,可以选择性地滞留在偏酸性的溶酶体中,从而实现对于溶酶体的特异性荧光标记。Green DND-26 适用于活细胞染色,但不适合用于固定后细胞的染色。其最大激发光波长为504nm,最大发射光波长为511nm。
使用说明(仅供参考)
使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。最佳工作浓度需根据不同的实验要求、细胞类型、细胞或组织的膜通透性等进行优化。
1.工作液的配制
利用培养基或合适的缓冲液将1mM 储存液稀释至工作浓度,推荐工作液浓度为50-75 nM,不超过100 nM;
【注意】:
1)为了降低探针加载过度可能引起的假阳性,建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。
2)若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育,会观察到荧光信号的衰减和细胞的空泡化现象。
2.染色
2 .1 对于贴壁细胞
1)将细胞置于培养皿中的盖玻片上,加入合适培养基,使其爬片生长。
2)待细胞生长到合适丰度,吸除培养液,加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育30min~2h(具体孵育时间需根据细胞类型而定)。
【注意】:对Green DND-26内化过程的动力学研究表明,活细胞摄取此染料仅需数秒即可。缺点在于此探针可能引起溶酶体产生“碱性效应Alkalizing effect”,也就是说过长孵育时间会诱导溶酶体pH值提高。建议仅当该探针于37℃孵育细胞1-5min才可用作pH指示剂。
3)利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜(含合适滤片)下观察。若染色不够充分,建议增加染料浓度或延长染色时间。
2.2 对于悬浮细胞
1)离心,吸除上清。
2)利用37℃预热的探针工作液重悬细胞,于生长状态下孵育30min~2h(具体时间需根据细胞类型而定)。
3)离心,吸除染色液,加入新鲜培养液重悬细胞。
4)置于荧光镜下观察。若染色不够充分,建议增加染料浓度或加长染色时间。
下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前,需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。
| 浓度/溶剂体积/质量 | 1 mg | 5 mg | 10 mg |
|---|---|---|---|
| 1 mM | 2.7607 mL | 13.8034 mL | 27.6068 mL |
| 5 mM | 0.5521 mL | 2.7607 mL | 5.5214 mL |
| 10 mM | 0.2761 mL | 1.3803 mL | 2.7607 mL |
*吸湿的DMSO对产品的溶解度有显著影响,请使用新开封的DMSO;
请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。
建议您制定动物给药及实验方案时,尽量参考已发表的相关实验文献(溶剂种类及配比众多,简单地溶解目的化合物,并不能解决动物给药依从性、体内生物利用度、组织分布等相关问题,未必能保证目的化合物在动物体内充分发挥生物学效用)。
体内实验的工作液,建议您现用现配,当天使用;如在配制过程中出现沉淀、析出现象,可以通过超声和(或)加热的方式助溶。
切勿一次性将产品全部溶解。
请在下面的计算器中,输入您的动物实验相关数据并点击计算,即可得到该实验的总需药量和工作液终浓度。
例如您给药剂量是10 mg/kg,平均每只动物的体重为20 g,每只动物的给药体积是100 μL,动物数量为20只,则该动物实验的总需药量为4 mg,工作液终浓度为2 mg/mL。
1:鉴于实验过程的损耗,建议您至少多配1-2只动物的量;
2:为该产品最终给药时的浓度。
以上参考文献由AI整理,仅供参考,AbMole 尚未独立确认这些文献的准确性。