PI [Propidium iodide]  别名：PI; 碘化丙啶

PI是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链DNA后释放红色荧光。常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测，常用于流式细胞仪分析。尽管PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与Calcein, AM、Hoechst 33258或Hoechst 33342等一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和 615nm。

使用说明（仅供参考）：

1. 储存液的配制：称取1mg PI粉末（M. Wt= 668.4），用1ml去离子水充分溶解后配置成1mg/ml（1.5 mM）的储存液。

4 ºC避光保存，至少6个月稳定。

2. 贴壁细胞复染步骤（荧光显微镜检测）

样本准备：根据自身样本选择合适的步骤固定细胞。PI染色一般在其它染色完成后再进行。PI复染要求细胞经透化处理。

RNase酶处理：若样本使用多聚甲醛，甲醛或者戊二醛固定，则需要进行RNase处理。若样本用甲醇/醋酸或者丙酮固定，通常不需要此步操作。

a) 于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡样本；

b) 将本品置于含有100 µg/mL DNase-free RNase的2×SSC溶液中37°C孵育20min；

c) 用2×SSC溶液清洗样本3次，每次1min。

a) 于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡样本；

b) 直接用2X SSC稀释1mg/ml（1.5 mM）PI储存液 1:3000，得到500 nM的PI工作液。通常添加300µL染液足够用于一个盖玻片细胞制片。染色1-5min。

c) 2×SSC清洗几次，流尽多余的缓冲液后，加入抗淬灭剂封片。

d) 选择荧光显微镜的合适滤片进行观察。

3.悬浮细胞复染步骤（流式细胞仪检测）

样本准备：根据自身样本选择合适的步骤固定细胞。或者使用如下的步骤：

a) 收集一定量的细胞，密度约 2 × 105 ~1 × 106。离心收集细胞，吸掉上清液，用手轻弹管壁就剩下的液体重悬细胞。之后加入1ml常温存放的PBS；

b) 将所有的重悬细胞转移到4ml于-20ºC预冷的无水乙醇，在高速涡旋混匀的同时一边用枪缓慢的添加细胞悬液到乙醇内。于-20ºC乙醇中固定5-15min。离心收集细胞，除去乙醇。用手轻弹管壁以弹松细胞后，加入5ml室温的PBS。允许细胞水化15min；

复染：

a) 用稀释液（100 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2 , 0.5 mM MgCl2 , 0.1% Nonidet P-40）稀释1mg/ml（1.5 mM）PI储存液 1:500，得到3 µM的PI工作液。

注：工作液的使用浓度可以根据自身实验体系调整，也可以直接使用PBS，HBSS等缓冲液直接稀释PI储存液到需要的浓度。

b) 样本制备的最后一步后离心收集细胞，去除上清，用手轻弹管壁以弹松细胞后，加入1ml的PI染色工作液。室温孵育15min后，流式细胞仪进行细胞分析。若用流式显微镜观察，则需要离心样本，去除上清并重悬细胞在新鲜的缓冲液中。吸取1滴悬液到载玻片上，盖上盖玻片后观察。

注意事项：PI对人体有刺激性，请注意适当防护。