Acridine Orange hydrochloride 别名：吖啶橙AO染液
吖啶橙(Acridine Orange，AO) 是一种荧光染料，主要用于染色区分核苷酸分子。Acridine Orange与正常的DNA结合时发绿色荧光（Ex = 488，Em = 525 nm），而与RNA或者单链DNA结合时发橙色荧光（Ex = 488，Em = 640 nm）。Acridine Orange还可用于染色病毒、寄生虫以及机体组织。
CAS No.：65-61-2
化学性质/溶解性/储存
| 分子量 | 301.81 |
| 分子式 | C17H19N3.HCl |
| CAS号 | 65-61-2 |
| 性状 | Solution |
| 中文名称 | 吖啶橙AO染液 |
| 储存条件 | 2-8°C, protect from light, sealed |
| 运输方式 | 冰袋运输，根据产品的不同，可能会有相应调整。 |
生物活性
吖啶橙(Acridine Orange，AO)为一种荧光染料，该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。其激发波长为488nm，吸收波长为520nm。当其结合双链DNA时500/526nm,发出绿色荧光，而结合单链DNA 或RNA时则460/650nm发出红色荧光，此独特的特征使其可用于细胞周期研究, 用流式细胞仪可区分出G0期、G1期、S期、G2期和M期五期，本产品还可用于溶酶体的染色。
与EB或Ethm-1合用可用于鉴定活细胞、死细胞和凋亡细胞。在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
实验方法（仅供参考）
1、吖啶橙染细胞核、凋亡小体（成像法）
1）细胞用PBS洗一次，
2）取PBS按100:1比例将吖啶橙染液稀释成染色工作液，混匀；（例:99μL PBS：AO染液 1μL/片或孔）
3）用染色工作液重悬或浸没细胞，室温避光染色15min，
4）加抗淬灭剂介质，加盖玻片；
5）荧光显微镜，激发滤光片波长488nm。阻断滤光片波长520nm观察，计数、拍照。
2、吖啶橙检测细胞周期 （流式法 ）
1）细胞用PBS洗一次，再用PBS重悬并调节细胞浓度约为106/mL；
2）1mL细胞悬液中加入1μL吖啶橙染液，轻轻混匀；
3）室温避光染色15min，
4）流式细胞仪检测
激发波长488nm，分别于520nm（FL1）和650nm（FL4）通道检测。
520nm（FL1）绿色信号代表dsDNA，则G2/M>S>G0/G1
650nm（FL4）红色信号代表RNA和ssDNA., 则G2/M>S>G1 >G0
G0期和G1期尽管DNA含量相同，但RNA含量G1期远高于G0期，
用吖啶橙检测RNA的红色荧光信号即可区分出G0和G1期，
如果还需要区分出G2和M期，则用RNA酶降解RNA，再将样本95˚C变性处理，使双链DNA部份变性为单链DNA，再用AO染色，则因G0比G1更易变性，则ssDNA 增加AO的结合，红光更强，同样M期比G2期更易变性， M期的红色信号比G2期强，由此可区分出五期。
3、吖啶橙检测溶酶体 （成像法、流式法）
1）(可选) 培养的细胞（培养板）加入阳性药bafilomycin A1 (30 nM) 诱导至少30 min，
2）在每mL细胞培养基中加入1μL吖啶橙染液，轻轻混匀；置细胞培养箱孵育15 min
3）如用荧光显微镜，则细胞用37˚C预温的PBS洗三次， 加甘油介质，镜检。
4）如用流式细胞仪，则将细胞转移至3.5-mL 流式管（如为贴壁细胞，可用胰酶消化或刮取下来），细胞用室温预热的PBS重悬并离心洗一次，再加入300-500µL室温预热的PBS轻混均匀，立即上流式细胞仪检测
激发Ex=488nm，以 Em=650-750 nm Far-Red （FL4）道检测，紫红色荧光信号。
4、吖啶橙与EB双染， 鉴定活细胞、死细胞和凋亡细胞
1）细胞用PBS洗一次，
2）取98μL PBS加入AO和EB各1μL，混匀配成染色工作液，
3）用染色工作液浸没细胞，室温避光染色15min，
4）加抗淬灭剂介质，加盖玻片；
5）荧光显微镜，激发滤光片波长488nm。阻断滤光片分别波长520nm、620 nm观察，计数、拍照。
6）计算细胞凋亡率和死亡率
细胞凋亡率 = 凋亡细胞÷细胞总数×100%
细胞坏死率 = 坏死细胞÷细胞总数×100%
实验参考
下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前，需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。
| 浓度/溶剂体积/质量 | 1 mg | 5 mg | 10 mg |
|---|---|---|---|
| 1 mM | 3.3133 mL | 16.5667 mL | 33.1334 mL |
| 5 mM | 0.6627 mL | 3.3133 mL | 6.6267 mL |
| 10 mM | 0.3313 mL | 1.6567 mL | 3.3133 mL |
*吸湿的DMSO对产品的溶解度有显著影响，请使用新开封的DMSO；
请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
建议您制定动物给药及实验方案时，尽量参考已发表的相关实验文献（溶剂种类及配比众多，简单地溶解目的化合物，并不能解决动物给药依从性、体内生物利用度、组织分布等相关问题，未必能保证目的化合物在动物体内充分发挥生物学效用）。
体内实验的工作液，建议您现用现配，当天使用；如在配制过程中出现沉淀、析出现象，可以通过超声和（或）加热的方式助溶。
切勿一次性将产品全部溶解。
请在下面的计算器中，输入您的动物实验相关数据并点击计算，即可得到该实验的总需药量和工作液终浓度。
例如您给药剂量是10 mg/kg，平均每只动物的体重为20 g，每只动物的给药体积是100 μL，动物数量为20只，则该动物实验的总需药量为4 mg，工作液终浓度为2 mg/mL。
1：鉴于实验过程的损耗，建议您至少多配1-2只动物的量；
2：为该产品最终给药时的浓度。
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