Y-27632 dihydrochloride  别名:Y27632; Y-27632 2HCl

目录号 M1817

Y-27632 是一种 ATP 竞争性的 ROCK-I 和 ROCK-II 抑制剂,对 ROCK-I 和 ROCK-II 的 Ki 值分别为 220 nM 和 300 nM。Y-27632常用于干细胞和类器官的培养,可抑制细胞内 Rho-ROCK 介导的肌球蛋白过度活化以及由此产生的细胞收缩和死亡,从而促进干细胞和类器官的存活并提高克隆形成效率。

Y-27632 dihydrochloride结构式

  CAS No.:129830-38-2

规格 价格 库存状态
Free Sample (0.5-1 mg)  ¥ 0 现货
10mM*1mL in DMSO ¥ 690 现货
2mg ¥ 400 现货
5mg ¥ 630 现货
10mg ¥ 850 现货
50mg ¥ 2640 现货
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Patent. CN106967672A 2017 Jul 21.

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质量标准及产品资料
化学性质/溶解性/储存
分子量 320.26
分子式 C14H21N3O.2HCl
CAS号 129830-38-2
溶解性(仅列举部分溶剂) Water ≥ 60 mg/mL
DMSO ≥ 35 mg/mL
储存条件 粉末型式       -20°C   3年;4°C   2年
溶于溶剂       -80°C   6个月;-20°C   1个月
运输方式 冰袋运输,根据产品的不同,可能会有相应调整。

*不同实验中用到的溶剂可能不同,具体实验所需溶剂及溶解方法请参考相关文献描述。

生物活性

Y-27632是一种具有口服活性的ATP竞争性的ROCK(Rho相关且含有卷曲螺旋结构域的蛋白激酶)抑制剂,主要作用于 ROCK-I 和 ROCK-II, Ki 值分别为 220 nM 和 300 nM。Y-27632对 ROCK家族成员的亲和力远高于其他Rho相关激酶,其对ROCK的亲和力是柠檬酸激酶和蛋白激酶 PKN的20-30倍。

Y-27632是一种类器官和干细胞培养过程中不可或缺的小分子抑制剂。Y-27632 可以阻止干细胞的凋亡,从而维持其多潜能性和自我更新能力。Y-27632 可以抑制胚胎干细胞(ESC)、间充质干细胞(MSC)、诱导多能干细胞(iPSC)等多种干细胞的凋亡并促进其增殖。在角膜保存过程中,Y-27632 能促进角膜缘干细胞(LSCs)的活力和克隆形成能力。此外,Y-27632 可通过上皮-间充质过渡样调节引发人诱导多能干细胞(iPSC)选择性地分化为间胚层谱系。Y-27632 也是多种类器官培养基中重要的组分,包括结直肠癌类器官、肝癌类器官和乳腺癌类器官等肿瘤类器官,以及肝脏类器官、脑类器官、肾脏类器官等正常类器官。

实验参考
蛋白/细胞实验

下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前,需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。

浓度/溶剂体积/质量 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.1225 mL 15.6123 mL 31.2246 mL
5 mM 0.6245 mL 3.1225 mL 6.2449 mL
10 mM 0.3122 mL 1.5612 mL 3.1225 mL

*吸湿的DMSO对产品的溶解度有显著影响,请使用新开封的DMSO;
 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。


质量   浓度   体积   分子量*
 =   x   x 

细胞系 人肠道类器官(ASC-5a和ASC-6a)
方法 For derivation of clonal lines, cells were sorted by fluorescence-activated cell sorting (FACS) and grown at a density of 50 cells per μl in BME. The ROCK inhibitor Y-27632 (10 μM; AbMole, M1817) was added for the first week of growth. Upon reaching a size of >100 μm diameter, organoids were picked and transferred to one well per organoid. All organoid lines were regularly tested to rule out mycoplasma infection and authenticated using SNP profiling. No statistical methods were used to predetermine sample size. The experiments were not randomized and the investigators were not blinded to allocation during experiments and outcome assessment.
浓度 10 μM
处理时间 7 Days

* 上述方法来自公开文献,仅供相同目的实验参考。如实验目的、材料、方法不同,请参考其他文献。

动物实验

建议您制定动物给药及实验方案时,尽量参考已发表的相关实验文献(溶剂种类及配比众多,简单地溶解目的化合物,并不能解决动物给药依从性、体内生物利用度、组织分布等相关问题,未必能保证目的化合物在动物体内充分发挥生物学效用)。
体内实验的工作液,建议您现用现配,当天使用;如在配制过程中出现沉淀、析出现象,可以通过超声和(或)加热的方式助溶。
切勿一次性将产品全部溶解。


动物实验方案计算器

请在下面的计算器中,输入您的动物实验相关数据并点击计算,即可得到该实验的总需药量和工作液终浓度。
例如您给药剂量是10 mg/kg,平均每只动物的体重为20 g,每只动物的给药体积是100 μL,动物数量为20只,则该动物实验的总需药量为4 mg,工作液终浓度为2 mg/mL。

mg/kg
uL
该动物实验的总需药量为 mg
工作液终浓度2 mg/mL

1:鉴于实验过程的损耗,建议您至少多配1-2只动物的量;
2:为该产品最终给药时的浓度。


动物模型 肝纤维化大鼠
配制 Y-27632溶解于生理盐水中(终浓度为2%)
剂量 30 mg/kg/天,持续4周
给药处理 经口给药(灌胃)

* 上述方法来自公开文献,仅供相同目的实验参考。如实验目的、材料、方法不同,请参考其他文献。

延伸阅读 (仅做信息扩展,不作实验参考)

Y-27632 是一种高选择性、ATP 竞争性的 Rho 相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)抑制剂,可靶向作用于ROCK1ROCK2Y-27632AbMoleM1817是原代细胞、干细胞和类器官培养所需的重要小分子化合物之一。

2015年起全球使用AbMoleY-27632M1817发表文章或专利的部分署名科研单位和公司有:荷兰皇家艺术与科学院Hubrecht 研究所(全球第一个类器官研究中心)、荷兰Oncode研究所、斯坦福大学、英国剑桥剑桥大学、加州大学伯克利分校、哈佛大学医学院、苏黎世联邦理工学院、冷泉港实验室、欧洲分子生物学实验室(EMBL)、苏黎世大学、瑞士洛桑洛桑联邦理工学院、柏林夏里特医学院、比利时布鲁塞尔自由大学(ULB)、鲁汶大学、荷兰癌症研究所、韩国延世大学、英国惠康桑格研究所、美国肯塔基大学、加拿大哥伦比亚大学、美国贝勒医学院、荷兰乌得勒支大学、德国莱布尼茨灵长类动物研究所、荷兰玛西玛公主儿童肿瘤医学中心、美国基因泰克公司、罗氏制药荷兰伊拉斯谟医学、首尔国立大学、柏林自由大学、奥地利因斯布鲁克医科大学、德国慕尼黑大学、荷兰阿姆斯特丹大学、美国纽约大学、清华大学、北京大学、香港中文大学、浙江大学、复旦大学、上海交通大学、华中科技大学四川大学华西医学院、西安交通大学、中南大学湘雅医院、......还有更多不断涌现!

一、 Y-27632的分子作用机理

Y-27632AbMoleM1817通过竞争性地结合ROCKATP结合位点,可逆地抑制其激酶活性。在细胞内,ROCK 处于Rho GTPase信号通路的下游,主要参与调节细胞的收缩、迁移、黏附以及细胞周期进程等重要的生物学过程。当 Rho GTPase 被激活时,它会与 ROCK 结合并使其活化,活化后的 ROCK 能够磷酸化多种底物蛋白,例如肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)的调节亚基 MYPT1。磷酸化后的 MYPT1 会降低 MLCP 的活性,导致肌球蛋白轻链(MLC)磷酸化水平升高,进而引起细胞骨架的收缩和重构。而Y-27632 通过抑制 ROCK 的活性,能够阻止 MYPT1 的磷酸化,维持 MLCP 的活性,使MLC去磷酸化,最终导致细胞骨架的松弛和相关细胞行为的改变。 此外,Y-27632ROCK的抑制作用也会间接影响细胞的增殖和死亡。

二、Y-27632的科研应用

1. Y-27632用于原代细胞的培养

细胞在体内处于一个非常复杂和精密的、由胞外基质(ECM)构成的支撑网络中。细胞通过整合素与特定的ECM成分(如胶原蛋白、纤连蛋白、层粘连蛋白)结合,这不仅提供了物理锚定,还持续传递着关键的生存信号(Survival Signals)。这些信号通过激活PI3K/AktFAK(黏着斑激酶) 等通路来抑制凋亡程序。一旦细胞被分离出来,整合素介导的信号中断,导致Rho GTPase被激活,进而强力激活ROCK。而激活的ROCK会磷酸化肌球蛋白轻链(MLC),并抑制MLC磷酸酶,导致MLC持续磷酸化。这会引起肌动球蛋白收缩力的急剧增强,细胞骨架严重紊乱,细胞膜出现剧烈的、不可控的皱缩(blebbing)和细胞凋亡,上述过程被形象的命名为失巢凋亡(Anoikis)[1]Y-27632AbMoleM1817作为ROCK的强效抑制剂,在作用于ROCK后,MLC磷酸化水平显著降低,肌球蛋白的收缩活动恢复正常。这使得细胞骨架在脱离ECM后仍能保持相对稳定的结构,阻止了凋亡性膜皱缩的发生,为细胞重新附着创造了条件。有文献使用Y-27632培养从食蟹猴中分离的原代角膜内皮细胞(MCECs),结果显示Y-27632有效提高了角膜内皮细胞的数量并抑制了细胞凋亡,促进MCECs的粘附[2]。此外,Y-27632还可以通过选择性阻断真皮细胞的粘连斑,简化原代表皮细胞的分离程序,且经过上述方法分离得到的表皮细胞具有较强的再生能力,可移植到小鼠体内快速建立表皮组织[3]

1. 失巢凋亡示意图[1]

原代细胞培养应用范例详解

ACS Biomater Sci Eng. 2025 Jan 13;11(1):451-462.

荷兰鹿特丹伊拉斯谟医学中心的科研团队在上述论文中设计了一种3D 打印的多孔流通板,该流通板具有较高的生物相容性,可支持细胞的微流控培养。为验证上述孔板的可用性,实验人员将原代支气管上皮细胞(hPBEC)和原代肺微血管内皮细胞(hMVEC)分别在接种到孔板的顶端和基底侧共培养,发现该孔板支持hPBEC粘液纤毛分化和hMVEC的快速增殖。在上述两种原代细胞的培养中,实验人员使用了由AbMole提供的Y-27632AbMoleM1817,浓度为5μM


2.原代HMVEChPBEC的共培养[4]

2. Y-27632用于干细胞和类器官的培养

与原代细胞类似,干细胞在分离、基因编辑、传代、保存和分化诱导等多个过程中也存在着失巢凋亡的现象。因此,Y-27632AbMoleM1817也常用于多种干细胞的培养与研究,包括成体干细胞、诱导多能干细胞(iPSC)和胚胎干细胞(ESC)等。例如Y-27632能够促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的增殖,加速细胞周期进程,提高细胞的分裂和增殖能力[5]有文章发现在人诱导多能干细胞(hiPSCs)来源的原始神经上皮细胞(NECs)中添加Y-27632,能够显著提高细胞解离后的贴壁存活率,降低细胞凋亡率,并促进细胞向多巴胺能神经前体细胞分化[6]。还有文献报导Y-27632AbMoleM1817可以用于猪气道干细胞的长期培养和无饲养层扩增,并且保留了干细胞的分化能力[7]。此外,Y-27632作为一种Rho激酶抑制剂,还在干细胞的冻存和复苏中具有重要作用,主要通过减少细胞凋亡和提高细胞存活率来增强干细胞的活性。例如Y-27632可有效提高骨髓间充质干细胞解冻后的活力,并且这种提高具有剂量依赖性,当培养基中的Y-27632的浓度为10 μM 时,效果达到峰值[8]Y-2763210 μM)还可有效提高胚胎干细胞的复苏存活率[9]

类器官是多能干细胞(hPSCs)或成体干细胞(ADSCs)衍生而来的,能够模拟真实器官功能的细胞群。Y-27632AbMoleM1817促进细胞增殖、调节类器官形成过程中的细胞分化和形态发生。例如在小鼠小肠类器官的培养中,在细胞铺板时添加10 μMY-27632,能够显著提高类器官的形成效率和细胞的存活率[10]Y-27632也是肠类器官长期培养和冻存所需的关键组分之一[11]Y-27632还可以通过抑制小鼠唾液腺类器官中的细胞解离,从而减少细胞铁死亡的发生[12]。在一些肿瘤类器官的培养中同样需要添加Y-27632例如前列腺癌、结肠癌、胃癌、卵巢癌以及循环肿瘤细胞衍生的类器官。2014年,AbMole的两款抑制剂分别被西班牙国家心血管研究中心和美国哥伦比亚大学用于动物体内实验,相关科研成果发表于顶刊 Nature Nature Medicine

干细胞和类器官培养应用范例详解

1. Nature. 2024 Aug;632(8024):411-418. (IF = 48.5)

瑞士苏黎世联邦理工学院的科研团队在上述文章中开发了一种基于体内 CRISPR 激活筛选的方法,旨在系统性研究肝细胞与转移肿瘤细胞之间的相互作用,以识别调控肝脏转移定植的宿主来源因子。核心发现如下:实验人员鉴定出肝细胞表面的plexin B2是结直肠癌、胰腺癌和黑色素瘤肝转移的关键调控因子,其通过与肿瘤细胞表面的 IV semaphorins 结合,促进转移灶形成。plexin B2 semaphorins 的相互作用可上调转录因子 KLF4,促进肿瘤细胞获得上皮表型(上皮化),这是转移细胞适应肝脏微环境的必要过程。阻断 plexin B2-semaphorin 轴可抑制上述肿瘤的肝转移定植。由AbMole提供的Y-27632AbMoleM1817在上述实验中主要用于维持细胞存活和抑制细胞凋亡,尤其在类器官培养和细胞转染过程中发挥重要作用在肿瘤类器官(如 AKPSAPTAK)的分离和培养中,添加 Y-27632 可减少单细胞分离后的细胞死亡,提高类器官形成效率;在 CRISPR 介导的基因编辑(如 Smad4 敲除)过程中,Y-27632 可增强细胞对转染操作的耐受性,维持细胞活力[13]

3. In vitro screen and Plexin B2 overexpression[13]

2. Nature. 2022 Aug;608(7923):609-617. (IF = 48.5)

荷兰癌症研究所(Netherlands Cancer Institute)、荷兰 Oncode 研究所的科研人员在上述论文中探究了纤维细胞生长因子受体 2FGFR2)的截断突变,并揭示其在多种肿瘤中的致癌作用。实验人员鉴定出 FGFR2 18 外显子(E18)截断突变(FGFR2ΔE18)是强效致癌驱动因子。该突变通过去除 C 端调控区域,导致受体持续激活,独立驱动肿瘤发生。肿瘤中的 FGFR2ΔE18 的产生机制多样,包括 I17/E18 区域的基因融合、E1-E17 部分扩增、E18 无义突变或移码突变等,这些突变在胆管癌、乳腺癌、胃癌等多种肿瘤中存在。FGFR2ΔE18 通过激活 MAPKPI3K-AKT-mTOR 等信号通路促进细胞增殖和存活,且无需其他驱动基因协同,比全长 FGFR2位点突变更具有致癌性。来自AbMoleY-27632AbMoleM1817被科研人员用于多个实验在小鼠乳腺上皮细胞(NMuMG)、Human肿瘤细胞系(如 KATO-III)及类器官培养中,Y-27632 可减少单细胞分离后的失巢凋亡,提高细胞存活和克隆形成效率。在 CRISPR 介导的基因编辑(如 FGFR2 突变体构建)或病毒转染过程中,Y-27632 可增强细胞对操作的耐受性,维持细胞活力。

4.  Human cancer cell lines depend on FGFR2ΔE18 variants[14]

3. Nat Med. 2019 May;25(5):838-849. IF = 50.0

荷兰Hubrecht研究所(Hubrecht Institute)和乌得勒支大学医学中心(UMC Utrecht)的研究团队在该文章中构建了一个卵巢癌类器官研究平台,旨在解决卵巢癌(OC)研究中缺乏能忠实反映肿瘤异质性和临床特征的体外模型的问题。实验人员证实卵巢癌类器官在组织学、基因组和基因表达水平上与来源肿瘤高度一致,保留了核异型性、生物标志物表达(如 PAX8p53)等特征,且长期传代后仍维持拷贝数变异(CNV)、反复突变等基因组特征,能捕获肿瘤内和肿瘤间的异质性。在卵巢癌组织解离和类器官培养中,AbMoleY-27632AbMoleM1817被实验人员用于培养类器官,以减少凋亡提高类器官的建立效率[15]

5. Subtype diversity and histological characterization of OC organoids[15]

4. Nature. 2016 Nov 24;539(7630):560-564. IF = 48.5

瑞士洛桑联邦理工学院(EPFL)的科研团队在上述文章中开发了一种基于合成水凝胶网络的模块化设计方法,旨在调节调控肠道干细胞(ISC)扩增和类器官形成的关键细胞外基质(ECM)参数。实验人员通过 polyethylene glycolPEG)水凝胶模拟天然ECM的物理和生化特性,发现不同阶段的ISC行为依赖于特定的基质环境。科研人员还设计了力学动态变化的水凝胶,初始硬度适合 ISC 扩增,随后逐渐软化以支持类器官形成。AbMoleY-27632AbMoleM1817在本文中被用于减少单细胞培养过程中的细胞凋亡以及促进类器官的形成[16]

6. Matrix mechanical properties control ISC proliferation[16]

5. Nature. 2020 Dec;588(7839):664-669.IF = 48.5

韩国浦项科技大学(Pohang University of Science and Technology)、韩国首尔国立大学的科研人员在该文章中构建了一种新型的膀胱肿瘤类器官,用于在体外模拟肿瘤微环境。实验人员通过用基质成分重构组织干细胞来创建多层膀胱组合体,以模拟具有上皮围绕基质和外层肌肉层的有组织结构的膀胱癌类器官,旨在解决传统类器官模型无法模拟成熟器官结构和相关组织微环境的问题。该类器官可用于模拟肿瘤的发生发展、免疫细胞浸润(如 CD8⁺ T 细胞介导的肿瘤杀伤)及药物筛选。在上述类器官的构建过程中,实验人员使用了由AbMole提供的Y-27632AbMoleM1817[17]

7. Generation of 3D reconstituted bladder assembloids[17]

6. Cell. 2024 Feb 1;187(3):712-732.e38. IF = 42.5

荷兰Princess Máxima儿科肿瘤中心、荷兰Hubrecht研究所(Hubrecht Institute)的科研人员构建了一种大脑类器官(FeBOs),发现FeBOs 具有三层结构:外周为SOX2⁺/Ki-67⁺神经祖细胞,中间为 HOPX⁺的外层放射状胶质细胞,中心为 TUJ1⁺/DCX⁺神经元。科研人员通过构建上述类器官重现了体内神经发生的分层组织。FeBOs可稳定传代超过8个月,体积扩大到15,000 倍,且保留原组织的区域特性。在类器官构建的过程中实验人员使用了来自AbMoleY-27632AbMoleM1817在干细胞(hESC)诱导生成皮质球(PSC-cortical spheroids)的初始阶段,添加 Y-27632 可减少单细胞培养时的凋亡,提高细胞存活效率[18]

8. FeBOs capture regional brain identities of the tissue of origin[18]

Since 2015, the research institutions and companies worldwide that have published articles or patents using AbMole's Y-27632 (M1817) with partial attribution include: Hubrecht Institute, Royal Netherlands Academy of Arts and Sciences (the world's first research institution to develop organoids)Oncode InstituteStanford UniversityUniversity of CambridgeHarvard Medical SchoolUniversity of California, BerkeleyETH ZurichUniversity of ZurichEcole Polytechnique Fédérale de LausanneUniversité Libre de Bruxelles (ULB)University of Leuven Charité-Universitätsmedizin BerlinEuropean Molecular Biology Laboratory (EMBL) Netherlands Cancer InstituteYonsei UniversityWellcome Sanger InstituteUniversity of KentuckyUniversity of British ColumbiaBaylor College of MedicineUtrecht UniversityLeibniz Institute for Primate ResearchPrincess Máxima Center for Pediatric OncologyGenentech Inc.Roche Innovation Center BaselCollege of Medicine, Erasmus Medical CenterCold Spring Harbor LaboratorySeoul National UniversityMedical University of InnsbruckLudwig-Maximilians-Universität München University of AmsterdamNew York UniversityFreie Universität BerlinTsinghua UniversityPeking UniversityChinese University of Hong KongZhejiang UniversityShanghai Jiao Tong UniversityFudan UniversityXi'an Jiaotong UniversityHuazhong University of Science and TechnologyWest China Hospital, Sichuan UniversityXiangya Hospital...More and more!

参考文献及鸣谢

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[3] J. Wen, T. Zu, Q. Zhou, et al., Y-27632 simplifies the isolation procedure of human primary epidermal cells by selectively blocking focal adhesion of dermal cells, Journal of tissue engineering and regenerative medicine 12(2) (2018) e1251-e1255.

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[5] Xiao Liu, Zhengzheng Zhang, Xianliang Yan, et al., The Rho kinase inhibitor Y-27632 facilitates the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells, 45(6) (2014) 707-714.

[6] Y. Li, J. Xu, C. Jiang, et al., [Rho kinase inhibitor Y27632 promotes survival of human induced pluripotent stem cells during differentiation into functional midbrain dopaminergic progenitor cells in vitro], Nan fang yi ke da xue xue bao = Journal of Southern Medical University 44(2) (2024) 236-243.

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[17] E. Kim, S. Choi, B. Kang, et al., Creation of bladder assembloids mimicking tissue regeneration and cancer, Nature 588(7839) (2020) 664-669.

[18] D. Hendriks, A. Pagliaro, F. Andreatta, et al., Human fetal brain self-organizes into long-term expanding organoids, Cell 187(3) (2024) 712-732.e38.






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