Rhod-4, AM 别名：钙离子荧光探针Rhod-4，AM
Rhod-4, AM是一种钙离子荧光探针 (λex=523 nm, λem=551 nm)。
化学性质/溶解性/储存
| 分子量 | 1015.96 |
| 中文名称 | 钙离子荧光探针Rhod-4，AM |
| 储存条件 | -20°C, protect from light |
| 运输方式 | 冰袋运输，根据产品的不同，可能会有相应调整。 |
生物活性
Rhod-4, AM是一种钙离子荧光探针 (λex=523 nm, λem=551 nm)。
溶液配制
1.储备溶液配制
Rhod-4 AM 储备溶液
在无水 DMSO 中制备 2 至 5 mM Rhod-4 AM 储备溶液。
2.工作溶液配制
Rhod-4 AM 工作溶液
2.1 实验当天，将 Rhod-4 AM 溶解在 DMSO 中，或将等份指示剂储备溶液解冻至室温。
2.2 在您选择的缓冲液（例如 Hanks 和 Hepes 缓冲液）中用 0.04% Pluronic F-127 制备 2 至 20 µM Rhod-4 AM 工作溶液。对于大多数细胞系，建议终浓度为 4-5 μM 的 Rhod-4 AM。细胞加载所需指示剂的准确浓度必须根据参考文献或经验确定。
注意：非离子洗涤剂 Pluronic F-127 有时用于增加 Rhod-4 AM 的水溶性。可以从AbMole购买。
注意：如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒 (1-2 mM) 添加到染料工作溶液中（孔中的最终浓度为 0.5-1 mM），以减少脱酯后染料的外漏。可从AbMole购买。
操作步骤
以下是我们整理的将Rhod-4 AM加入活细胞的方案。 该方案仅提供指南，实际应根据您的实验需求进行修改。
a）将细胞在生长培养基中培养过夜。
b）第二天，将 1X Rhod-4 AM 工作溶液添加到细胞孔板中。
注意：如果您的化合物干扰血清，请在上样前用新鲜的 HHBS 缓冲液替换生长培养基。
c）将载有染料的孔板在细胞培养箱中于 37°C 下孵育 30 至 60 分钟。
注意：孵育染料超过 1 小时可以提高某些细胞系的信号强度。
d）用 HHBS 或您选择的缓冲液（包含阴离子转运蛋白抑制剂，例如 1 mM 丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除任何多余的探针。
e）根据需要添加刺激剂，同时使用配备 TRITC 滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统（例如 FDSS、FLIPR 或 FlexStation）的荧光酶标仪在 Ex/Em = 540/590 nm 处测量荧光。
实验参考
下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前，需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。
| 浓度/溶剂体积/质量 | 1 mg | 5 mg | 10 mg |
|---|---|---|---|
| 1 mM | 0.9843 mL | 4.9215 mL | 9.8429 mL |
| 5 mM | 0.1969 mL | 0.9843 mL | 1.9686 mL |
| 10 mM | 0.0984 mL | 0.4921 mL | 0.9843 mL |
*吸湿的DMSO对产品的溶解度有显著影响，请使用新开封的DMSO；
请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
建议您制定动物给药及实验方案时，尽量参考已发表的相关实验文献（溶剂种类及配比众多，简单地溶解目的化合物，并不能解决动物给药依从性、体内生物利用度、组织分布等相关问题，未必能保证目的化合物在动物体内充分发挥生物学效用）。
体内实验的工作液，建议您现用现配，当天使用；如在配制过程中出现沉淀、析出现象，可以通过超声和（或）加热的方式助溶。
切勿一次性将产品全部溶解。
请在下面的计算器中，输入您的动物实验相关数据并点击计算，即可得到该实验的总需药量和工作液终浓度。
例如您给药剂量是10 mg/kg，平均每只动物的体重为20 g，每只动物的给药体积是100 μL，动物数量为20只，则该动物实验的总需药量为4 mg，工作液终浓度为2 mg/mL。
1：鉴于实验过程的损耗，建议您至少多配1-2只动物的量；
2：为该产品最终给药时的浓度。
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