Collagenase (Type II)  别名：胶原酶II型

胶原酶II型 Collagenase 是从溶组织梭状芽胞杆菌发酵而得的一种蛋白酶，同时还可用于构建骨关节炎的动物研究。

使用方法：

向每管200mg的胶原酶中加入100µL的含Ca2+、Mg2+的HBSS（Hank’s平衡盐溶液，含Ca2+、Mg2+），轻轻旋涡震荡使其充分溶解，制备成2g/ml（即1000×）的储存液。然后用低蛋白结合性的0.22μm的滤膜过滤除菌，分装成小份量，然后于-20℃避光冻存。使用前置于冰上融化，避免反复冻融。建议胶原酶的工作浓度范围50-200U/ml（或0.5-2.5mg/ml），具体使用浓度请根据具体消化对象或参考文献来调整。

一、组织分离

1）用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4mm小片，之后用含钙镁的HBSS缓冲液清洗组织片几次；

2）加足量含钙镁的HBSS缓冲液浸没组织片，之后按照50-200U/ml用量加入适量胶原酶；

3）37℃孵育4-18h，置于水平摇床并且孵育体系加入3mM CaCl2可提高消化效率。

4）将消化好的细胞混合物用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。

5）将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。

6）低速离心，吸掉清洗液。最后用适当的细胞培养液重悬细胞，使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。

二、器官灌注

1）将胶原酶加入37℃预热含钙镁的HBSS缓冲液，使其浓度为50-200U/ml，或根据具体实验体系调整；另加入3mM CaCl2可提高消化效率。

2）按照针对特定器官的预优化频率来进行灌注；

3）将收集到的细胞/组织混合碎片用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。

4）将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。

6）低速离心，吸掉清洗液。最后用适当的细胞培养液重悬细胞，使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。

客户使用实例

一、成年小鼠心肌细胞/心脏巨噬细胞分离

The mouse hearts were removed and attached to the Langendorff perfusion system (Radnoti; ADInstruments, Ltd.) in 1x basal solution with 10 mM d-(+)-Glucose, 10 mM 2,3-butanedione monoxime and 5 mM taurine. The pH was adjusted to 7.4 at 37˚C and filtered with a bottle top filtration unit. The heart was then digested using a circulating enzyme digestion solution (collagenase type 2; CAS no. 9001-12-1; AbMole Bioscience Inc.; the pH was adjusted to 7.4 at 37˚C with a final concentration of 525 U/ml) at 37˚C for 15-20 min. The physiological morphology of cardiomyocytes was then observed though microscope, with a ‘brick-like’ appearance considered to be ‘healthy’. The isolated cardiomyocytes were then filtered through a 250 µm filter and seeded onto culture dishes coated with 20 mM HEPEs, 4 mM NaHCO3, 0.1 mg/ml bovine serum albumin (AbMole Bioscience Inc.) and 10 µg/ml laminin at 37˚C for 12 h.

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC11140287/