胰蛋白酶是由223个氨基酸残基的单链多肽所组成,通过从胰蛋白酶原在Lys - lle肽键处被切割去除N末端六肽而产生。 氨基酸的序列是由6个二硫桥所交联而成的。 这是胰蛋白酶、β-胰蛋白酶的天然形式。 β-胰蛋白酶可发生自溶,并在Lys - Ser残基处切割以产生α-胰蛋白酶。 胰蛋白酶是丝氨酸蛋白酶家族的一员。
CAS号 | 9002-07-7 |
性状 | Lyophilized powder |
中文名称 | 胰蛋白酶(牛胰腺) |
溶解性 | 1mM HCL: 1 mg/mL |
储存条件 | -20°C |
运输方式 | 冰袋运输,根据产品的不同,可能会有相应调整。 |
胰蛋白酶切割赖氨酸和精氨酸残基的 C 端肽。 如果酸性残基位于切割位点的任一侧,则该反应的水解速度减慢,并且如果脯氨酸残基位于切割位点的羧基侧,则停止水解。 胰蛋白酶活性的最适 pH 为 7-9。 胰蛋白酶还可以起到裂解氨基酸合成衍生物的酯和酰胺键的作用。 将 EDTA 作为螯合剂添加到胰蛋白酶溶液中,用于中和钙离子和镁离子,这些离子遮蔽胰蛋白酶作用的肽键。 去除这些离子会增加酶活性。
丝氨酸蛋白酶抑制剂,包括 DFP、TLCK、APMSF、AEBSEF 和抑肽酶等,将抑制胰蛋白酶。
应用
对于胰蛋白酶消化肽,胰蛋白酶:肽 使用约为 1:100 至 1:20 的比例。从培养表面除去粘附细胞是本产品的一个典型应用。 从其底物中去除细胞所需的胰蛋白酶浓度主要取决于细胞类型和培养物的年龄。 胰蛋白酶也被用于细胞培养期间细胞的再悬浮、蛋白质组学研究中的蛋白质消化和各种凝胶内消化。 其他应用包括:通过基于膜的技术评估结晶,用在确定动力学陷阱的存在会限制蛋白质的折叠速率和产量的一项研究中。
制备说明
可以1 mg/mL溶于1 mM HCl。
它还经TPCK处理并透析。 用L-1-甲苯磺酰胺-2-苯乙基氯甲基酮(TPCK)处理可降低通常存在于胰蛋白酶中的胰凝乳蛋白酶活性。
注意
在1 mM HCl中的溶液经分装并储存在-20°C可稳定1年。Ca2+的存在将也会消除胰蛋白酶的自溶并维持其在溶液中的稳定性。 胰蛋白酶在2.0 M尿素、2.0 M盐酸胍或0.1% (w/v) SDS中可维持其绝大多数的活性。
建议您制定动物给药及实验方案时,尽量参考已发表的相关实验文献(溶剂种类及配比众多,简单地溶解目的化合物,并不能解决动物给药依从性、体内生物利用度、组织分布等相关问题,未必能保证目的化合物在动物体内充分发挥生物学效用)。
体内实验的工作液,建议您现用现配,当天使用;如在配制过程中出现沉淀、析出现象,可以通过超声和(或)加热的方式助溶。
切勿一次性将产品全部溶解。
请在下面的计算器中,输入您的动物实验相关数据并点击计算,即可得到该实验的总需药量和工作液终浓度。
例如您给药剂量是10 mg/kg,平均每只动物的体重为20 g,每只动物的给药体积是100 μL,动物数量为20只,则该动物实验的总需药量为4 mg,工作液终浓度为2 mg/mL。
1:鉴于实验过程的损耗,建议您至少多配1-2只动物的量;
2:为该产品最终给药时的浓度。