Collagenase I(胶原蛋白酶 I 型)又称胶原酶、梭菌肽酶,是从溶组织梭状芽胞杆菌发酵而得的一种蛋白酶。可用于分离上皮、肺、脂肪和肾上腺组织细胞。本品为胶原蛋白酶I型。
胶原蛋白酶又称胶原酶、梭菌肽酶,英文名Collagenase,是从溶组织梭状芽胞杆菌发酵而得的一种蛋白酶。
本品为胶原蛋白酶I型
使用方法:
一、储存液制备
1)直接往100mg胶原酶内加入100µl含钙镁的HBSS缓冲液,轻轻漩涡震荡确保完全溶解混匀。
2)根据具体批次的酶活力,用含钙镁的HBSS缓冲液调整酶浓度到100U/µl(1000×储存液),之后用低蛋白吸附滤膜过滤除菌。
3)立即使用或将储存液根据单次用量分装,置于-20℃避光保存。
4)使用前置于冰上融化,避免反复冻融。建议胶原酶的工作浓度范围50-200U/ml(或0.5-2.5mg/ml),具体使用浓度请根据具体消化对象或参考文献来调整。
二、组织分离
1)用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4mm小片,之后用含钙镁的HBSS缓冲液清洗组织片几次;
2)加足量含钙镁的HBSS缓冲液浸没组织片,之后按照50-200U/ml用量加入适量胶原酶;
3)37℃孵育4-18h,置于水平摇床并且孵育体系加入3mM CaCl2可提高消化效率。
4)将消化好的细胞混合物用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。
5)将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。
6)低速离心,吸掉清洗液。最后用适当的细胞培养液重悬细胞,使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。
三、器官灌注
1)将胶原酶加入37℃预热含钙镁的HBSS缓冲液,使其浓度为50-200U/ml,或根据具体实验体系调整;另加入3mM CaCl2可提高消化效率。
2)按照针对特定器官的预优化频率来进行灌注;
3)将收集到的细胞/组织混合碎片用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。
4)将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。
6)低速离心,吸掉清洗液。最后用适当的细胞培养液重悬细胞,使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。
Stem Cell Res. 2024 Jun;Volume 77, 103387.
CAS号 | 9001-12-1 |
溶解性(25°C) | Soluble in aqueous buffers |
储存条件 | -20°C, dry, sealed |
运输方式 | 冰袋运输,根据产品的不同,可能会有相应调整。 |
[2] Robert R Slater Jr. J Hand Surg Am. Concerns for Collagenase
[3] Sohita Dhillon. Drugs. Collagenase Clostridium Histolyticum: A Review in Peyronie's Disease
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