Blasticidin S hydrochloride(灭瘟素S盐酸盐;杀稻瘟菌素盐酸盐)是一种从Streptomyces griseochromogenes中分离的核苷抗生素,可以抑制细菌和真核生物体内的蛋白质合成。
分子量 | 458.9 |
分子式 | C17H26N8O5.HCl |
CAS号 | 3513-03-9 |
中文名称 | 杀稻瘟菌素盐酸盐;灭瘟素S盐酸盐 |
溶解性 | Water ≥ 10 mg/mL |
储存条件 |
粉末型式 -20°C 3年;4°C 2年 溶于溶剂 -80°C 6个月;-20°C 1个月 |
运输方式 | 冰袋运输,根据产品的不同,可能会有相应调整。 |
Blasticidin S hydrochloride是一种从Streptomyces griseochromogenes中分离的核苷抗生素。灭瘟素S属于抗生素,具有真菌属性,通过研究肽键的形成,可以抑制细菌和真核生物体内蛋白质合成,并且可以有效防止稻瘟病病。Blasticidin S (BlaS)灭瘟素S常被用作含有抗癌基因bls, bsr, or BSD癌变细胞的选择性试剂。
应用浓度
1)Escherichia coli
E. coli对Blasticidin S的敏感性稍差,但是转化子对Blasticidin S具有耐受性,可以用低盐LB培养基(pH 8)进行筛选,浓度范围为50-100 μg/mL Blasticidin S。高pH值可以提高Blasticidin S的活性。
2)哺乳动物细胞
哺乳动物细胞中Blasticidin S的工作浓度范围在1-50 μg/mL。初次实验建议通过灭杀曲线来确定最佳使用浓度。
一些哺乳动物细胞的建议工作浓度:
细胞 |
种属 |
组织 |
培养基 |
Blasticidin S浓度 (μg/mL) |
HeLa |
Human |
Uterus |
DMEM |
3-10 |
293 |
Human |
Kidney |
DMEM |
3-10 |
B16 |
Mouse |
Melanoma |
RPMI |
3-10 |
PC1.0 |
Hamster |
Adenocarcinoma |
RPMI |
10-30 |
操作步骤(哺乳动物稳转株筛选)
Blasticidin S通常使用浓度为10 μg/mL。携带bsr或BSD基因的质粒转染到细胞中,在含有Blasticidin S的正常生长培养基中孵育,用于筛选稳定转染细胞株。
1)转染后48h,用含有适宜浓度Blasticidin S的新鲜培养基将细胞传代(注:细胞处于活跃分裂期时抗生素工作最好。细胞密度太高,抗生素效率降低。细胞分盘时覆盖率最好不超过25%)。
2)每3-4天去除培养基,加入含抗生素的新鲜培养基。
3)7天后检测细胞集落形成。根据宿主细胞种类和转染/筛选效率,集落形成可能需要增加一周或更久。
4)转移5-10个耐受克隆到35 mm细胞盘中,加入选择培养基维持培养7天。随后用细胞毒性实验进行检测。
下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前,需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。
浓度/溶剂体积/质量 | 1 mg | 5 mg | 10 mg |
---|---|---|---|
1 mM | 2.1791 mL | 10.8956 mL | 21.7912 mL |
5 mM | 0.4358 mL | 2.1791 mL | 4.3582 mL |
10 mM | 0.2179 mL | 1.0896 mL | 2.1791 mL |
*吸湿的DMSO对产品的溶解度有显著影响,请使用新开封的DMSO;
请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。
建议您制定动物给药及实验方案时,尽量参考已发表的相关实验文献(溶剂种类及配比众多,简单地溶解目的化合物,并不能解决动物给药依从性、体内生物利用度、组织分布等相关问题,未必能保证目的化合物在动物体内充分发挥生物学效用)。
体内实验的工作液,建议您现用现配,当天使用;如在配制过程中出现沉淀、析出现象,可以通过超声和(或)加热的方式助溶。
切勿一次性将产品全部溶解。
请在下面的计算器中,输入您的动物实验相关数据并点击计算,即可得到该实验的总需药量和工作液终浓度。
例如您给药剂量是10 mg/kg,平均每只动物的体重为20 g,每只动物的给药体积是100 μL,动物数量为20只,则该动物实验的总需药量为4 mg,工作液终浓度为2 mg/mL。
1:鉴于实验过程的损耗,建议您至少多配1-2只动物的量;
2:为该产品最终给药时的浓度。