AbMole快速BCA蛋白定量试剂盒

AbMole快速BCA蛋白定量试剂盒是一种迅速、高灵敏度、去垢剂兼容的蛋白定量试剂。在碱性条件将Cu2+转化为Cu+，再与BCA反应生成紫色络合物，在A562 nm处比色检测进行总蛋白的定量。因此可以通过已知蛋白标准品的标准曲线计算未知样品的蛋白质含量。

试剂盒组成

组分	250T	500T	储存条件
Instant BCAReagent A	50 ml	100 ml	4℃
Instant BCAReagent B	1 ml	2×1 ml	4℃
BSA Standard (2 mg/ml)	1 ml	2×1 ml	-20℃

储存条件

AbMole Instant BCAReagent A：4℃保存

AbMole Instant BCAReagent B：4℃避光保存

AbMole Instant BSA Standard：-20℃保存

本试剂盒在传统BCA法基础上优化改良，仅需20秒即可完成孵育，快速、高效、准确。

使用说明

1、制备BCA工作液

a. 根据公式： (标准品的个数 + 待测蛋白质样本的个数) × (实验重复次数) ×(每个样本的工作液的体积) ，计算所需的工作液总体积。在96孔板中，每个样本需要 200µl工作液。

b. 按50体积BCA试剂A与1体积BCA试剂B混合，制备工作液。

注：当试剂B加入试剂A中时，会观察到浑浊产生，混匀后浑浊消失，得到绿色澄清工作液。工作液室温避光保存，可稳定1周。

示例: 如总共需要3.672 ml BCA工作液，则混合3.6ml试剂A与 72µl试剂B

2、测定标准品和样品吸光度

a. 将待测蛋白样品稀释至适当浓度后，取10uL样品加入96孔板的样品孔中。

b. 向各孔加入200µl BCA工作液，充分混匀，加盖后放入微波炉，用烧杯装100 ml水一起放入微波炉，最大功率加热20 s。

c. 将96孔板取出，用酶标仪测定A562 nm处的吸光度值。

注：(a)加热结束后可直接使用酶标仪测定吸光度值，无需冷却至室温；(b)若需使用分光光度计和比色皿测定吸收值，可按上述相同方法在96孔板或其他可耐受微波加热的容器内完成样品加热后将样品转移至比色皿测定562 nm吸光度。

3、计算样品浓度

a. 以蛋白浓度（mg/ml）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

b. 将测定样品吸光度值代入标准曲线，计算出测定样品的蛋白浓度，再乘以相应的稀释倍数，得到待测样品的实际浓度。

如果蛋白抽提试剂中含有大量去垢剂且不含有螯合剂、还原剂时，使用BCA法；如果蛋白里含有EDTA等金属螯合剂或者含有还原型物质，且不含有去垢剂时，使用Bradford法。