Tyramide Amplification Buffer (1×) 为即用型缓冲液,主要用于通过酪酰胺信号放大 (TSA) 技术对细胞和组织进行的免疫染色。只需在该缓冲液中稀释酪酰胺化合物即可制成工作液。按每个样品使用100 μL计算,20 mL可以做200个样品。
性状 | Liquid |
中文名称 | 酪氨放大缓冲液 |
储存条件 | 4°C, protect from light |
运输方式 | 冰袋运输,根据产品的不同,可能会有相应调整。 |
Tyramide Amplification Buffer (1×) 为即用型缓冲液,主要用于通过酪酰胺信号放大 (TSA) 技术对细胞和组织进行的免疫染色。只需在该缓冲液中稀释酪酰胺化合物即可制成工作液。按每个样品使用100 μL计算,20 mL可以做200个样品。
实验步骤(仅供参考)
以下方案针对96孔板中的固定细胞或大小约10 mm×10 mm的组织切片,可以根据样本的大小按比例缩放。
1. 根据样本和抗体执行相应的固定、封闭和抗体标记的步骤。样品必须用抗体或链霉亲和素耦合的HRP结合物标记。我们建议使用我司酪酰胺信号放大试剂盒进行最佳的封闭和二抗标记。
2. 抗体(链霉亲和素)-HRP结合物标记后,用洗涤缓冲液1×PBS洗涤样品3次,每次5 min。
3. 用1× Tyramide Amplification Buffer将染料-酪酰胺探针制成工作溶液。染料-酪酰胺探针的终浓度可以根据具体应用而改变。向96孔板的每个孔中或每个组织切片上加入100 μL工作液。工作溶液可在室温下避光保存长达24 h。
4. 室温避光孵育10 min。
5. 用洗涤缓冲液1×PBS洗涤样品3次,每次5 min。
6. 可选:如果使用Biotin-酪酰胺,可使用荧光标记的链霉亲和素进行荧光显色,也可使用含HRP的链霉亲和素标记,后使用DAB显色。
7. 显微镜成像。对于载玻片上的组织样本,请盖上盖玻片并密封后,再显微镜成像。
注意事项
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
建议您制定动物给药及实验方案时,尽量参考已发表的相关实验文献(溶剂种类及配比众多,简单地溶解目的化合物,并不能解决动物给药依从性、体内生物利用度、组织分布等相关问题,未必能保证目的化合物在动物体内充分发挥生物学效用)。
体内实验的工作液,建议您现用现配,当天使用;如在配制过程中出现沉淀、析出现象,可以通过超声和(或)加热的方式助溶。
切勿一次性将产品全部溶解。
请在下面的计算器中,输入您的动物实验相关数据并点击计算,即可得到该实验的总需药量和工作液终浓度。
例如您给药剂量是10 mg/kg,平均每只动物的体重为20 g,每只动物的给药体积是100 μL,动物数量为20只,则该动物实验的总需药量为4 mg,工作液终浓度为2 mg/mL。
1:鉴于实验过程的损耗,建议您至少多配1-2只动物的量;
2:为该产品最终给药时的浓度。