MitoTracker Green FM 是线粒体绿色荧光染料,该染料在线粒体中的定位并不受线粒体膜电位的影响。该染料可以染活细胞,但是在醛类固定剂固定之后,会导致荧光信号丢失。其最大激发/发射波长为490/516nm。-20℃避光干燥保存。
MitoTracker Green FM是一种细胞渗透型的carbocyanine结构衍生物,包含标记线粒体的弱巯基反应性的氯甲基官能团。本品是一种亮绿色荧光探针((Ex=490 nm,Em=516 nm)),其在水溶液中几乎不发荧光,只有当聚集在线粒体的脂质环境才能发荧光,背景荧光几乎可忽略。本品经乙醛固定后染料不稳定,因此更适合活细胞染色。
使用方法
1. 储存液的配制
使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简单低速离心使溶液降至管底。之后加入74.4µL高质量无水的DMSO溶解MitoTracker Green FM(Mw=671.88 g/mol),使其浓度为1mM。可根据单次的使用量将储存液分装后放到-20℃避光,避免反复冻融。
2. 工作液的配制
根据不同的实验目的使用不同的探针浓度,以下的起始操作条件仅作参考,可根据细胞类型和其他的相关因素如细胞或组织的透化等进行适当调整。
利用培养基或合适的缓冲液将1mM储存液稀释至工作浓度,工作液需现配现用。对于MitoTracker Green FM,使用相对偏低浓度(20-200nM)进行染色。若使用更高推荐浓度可能会染上其他细胞结构。
【注意】
1)为了降低探针加载过度可能引起的假阳性,建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。
2)若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育,会观察到荧光信号的衰减和细胞的空泡化现象。
3. 染色及检测
3.1. 贴壁细胞的染色
培养皿/板内加入适量的培养基覆盖盖玻片进行爬片培养。当细胞长至所需丰度,吸除培养液,加入37℃预热的MitoTracker Green FM染色工作液。在所使用细胞正常培养条件下孵育15-45 min(最佳孵育时间需优化)。染色结束后,使用新鲜培养液或缓冲液替换上述染色液,即可将其置于荧光显微镜下观察或荧光酶标仪下读数。
3.2. 悬浮细胞的染色
离心收集细胞,吸除上清,利用37℃预热的MitoTracker Green FM染色工作液轻轻重悬细胞。在所使用细胞正常培养条件下孵育15-45 min(最佳孵育时间需优化)。染色结束后,离心收集细胞,利用37℃预热的新鲜培养液或缓冲液重悬细胞,被染色的细胞可用流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光显微镜进行分析。
分子量 | 671.8797 |
分子式 | C34H28Cl5N3O |
CAS号 | 201860-17-5 |
溶解性(25°C) | DMSO: Soluble |
储存条件 | -20°C, protect from light, dry, sealed |
运输方式 | 冰袋运输,根据产品的不同,可能会有相应调整。 |
*下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前,需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。
Concentration / Solvent Volume / Mass | 1 mg | 5 mg | 10 mg |
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1 mM | 1.4884 mL | 7.4418 mL | 14.8836 mL |
5 mM | 0.2977 mL | 1.4884 mL | 2.9767 mL |
10 mM | 0.1488 mL | 0.7442 mL | 1.4884 mL |
小鼠 | 大鼠 | 兔 | 豚鼠 | 仓鼠 | 狗 | |
重量 (kg) | 0.02 | 0.15 | 1.8 | 0.4 | 0.08 | 10 |
体表面积 (m2) | 0.007 | 0.025 | 0.15 | 0.05 | 0.02 | 0.5 |
Km 系数 | 3 | 6 | 12 | 8 | 5 | 20 |
动物 A (mg/kg) = 动物 B (mg/kg) × | 动物 B的Km系数 |
动物 A的Km系数 |
例如,依据体表面积折算法,将化合物用于小鼠的剂量20 mg/kg 换算成大鼠的剂量,需要将20 mg/kg 乘以小鼠的Km系数(3),再除以大鼠的Km系数(6),得到化合物用于大鼠的等效剂量为10 mg/kg。
[5] Luis F Marques-Santos, et al. Biosci Rep. Mitotracker green is a P-glycoprotein substrate
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