MitoTracker Green FM 是线粒体绿色荧光染料,该染料在线粒体中的定位并不受线粒体膜电位的影响。该染料可以染活细胞,但是在醛类固定剂固定之后,会导致荧光信号丢失。其最大激发/发射波长为490/516nm。-20℃避光干燥保存。
分子量 | 671.8797 |
分子式 | C34H28Cl5N3O |
CAS号 | 201860-17-5 |
中文名称 | 线粒体绿色荧光探针 |
溶解性 | DMSO: Soluble |
储存条件 | -20°C, protect from light, dry, sealed |
运输方式 | 冰袋运输,根据产品的不同,可能会有相应调整。 |
MitoTracker Green FM是一种细胞渗透型的carbocyanine结构衍生物,包含标记线粒体的弱巯基反应性的氯甲基官能团。本品是一种亮绿色荧光探针((Ex=490 nm,Em=516 nm)),其在水溶液中几乎不发荧光,只有当聚集在线粒体的脂质环境才能发荧光,背景荧光几乎可忽略。本品经乙醛固定后染料不稳定,因此更适合活细胞染色。
使用方法
1. 储存液的配制
使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简单低速离心使溶液降至管底。之后加入74.4µL高质量无水的DMSO溶解MitoTracker Green FM(Mw=671.88 g/mol),使其浓度为1mM。可根据单次的使用量将储存液分装后放到-20℃避光,避免反复冻融。
2. 工作液的配制
根据不同的实验目的使用不同的探针浓度,以下的起始操作条件仅作参考,可根据细胞类型和其他的相关因素如细胞或组织的透化等进行适当调整。
利用培养基或合适的缓冲液将1mM储存液稀释至工作浓度,工作液需现配现用。对于MitoTracker Green FM,使用相对偏低浓度(20-200nM)进行染色。若使用更高推荐浓度可能会染上其他细胞结构。
【注意】
1)为了降低探针加载过度可能引起的假阳性,建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。
2)若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育,会观察到荧光信号的衰减和细胞的空泡化现象。
3. 染色及检测
3.1. 贴壁细胞的染色
培养皿/板内加入适量的培养基覆盖盖玻片进行爬片培养。当细胞长至所需丰度,吸除培养液,加入37℃预热的MitoTracker Green FM染色工作液。在所使用细胞正常培养条件下孵育15-45 min(最佳孵育时间需优化)。染色结束后,使用新鲜培养液或缓冲液替换上述染色液,即可将其置于荧光显微镜下观察或荧光酶标仪下读数。
3.2. 悬浮细胞的染色
离心收集细胞,吸除上清,利用37℃预热的MitoTracker Green FM染色工作液轻轻重悬细胞。在所使用细胞正常培养条件下孵育15-45 min(最佳孵育时间需优化)。染色结束后,离心收集细胞,利用37℃预热的新鲜培养液或缓冲液重悬细胞,被染色的细胞可用流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光显微镜进行分析。
下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前,需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。
浓度/溶剂体积/质量 | 1 mg | 5 mg | 10 mg |
---|---|---|---|
1 mM | 1.4884 mL | 7.4418 mL | 14.8836 mL |
5 mM | 0.2977 mL | 1.4884 mL | 2.9767 mL |
10 mM | 0.1488 mL | 0.7442 mL | 1.4884 mL |
*吸湿的DMSO对产品的溶解度有显著影响,请使用新开封的DMSO;
请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。
建议您制定动物给药及实验方案时,尽量参考已发表的相关实验文献(溶剂种类及配比众多,简单地溶解目的化合物,并不能解决动物给药依从性、体内生物利用度、组织分布等相关问题,未必能保证目的化合物在动物体内充分发挥生物学效用)。
体内实验的工作液,建议您现用现配,当天使用;如在配制过程中出现沉淀、析出现象,可以通过超声和(或)加热的方式助溶。
切勿一次性将产品全部溶解。
请在下面的计算器中,输入您的动物实验相关数据并点击计算,即可得到该实验的总需药量和工作液终浓度。
例如您给药剂量是10 mg/kg,平均每只动物的体重为20 g,每只动物的给药体积是100 μL,动物数量为20只,则该动物实验的总需药量为4 mg,工作液终浓度为2 mg/mL。
1:鉴于实验过程的损耗,建议您至少多配1-2只动物的量;
2:为该产品最终给药时的浓度。