JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit(线粒体膜电位检测试剂盒 (JC-1)) 是一种以 JC-1 为荧光探针,能快速灵敏地检测组织、细胞或纯化的线粒体跨膜电势差的试剂盒,可以用于早期的细胞凋亡检测。
JC-1线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit)是一种以JC-1 为荧光探针,快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化的试剂盒,可以用于早期的细胞凋亡检测,也是用来检测细胞早期凋亡的常用方法。
本试剂盒提供了CCCP 作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。对于六孔板中的样品,本试剂盒共可以检测100 个样品;对于12 孔中的样品,本试剂盒共可以检测200 个样品。
组分 | 规格 |
M9724 JC-1 | 3 mM in DMSO * 600 uL |
M6567 CCCP | 50 mM in DMSO * 300 uL |
操作说明
1) 悬浮细胞:
a. 以 6 孔板为例,每孔用 1 mL 培养基重悬 100 万细胞,其他培养器皿以此类推。
b. 阳性对照的设置:取适量 CCCP (50 mM) 恢复至室温,阳性对照孔培养基中加入 1 μL,其终浓度为 50 μM,细胞培养箱 37℃ 孵育 5 分钟。
c. 取适量 JC-1 (3 mM) 恢复至室温,每孔培养基中加入 5 μL JC-1 (3 mM),其终浓度为 15 μM,细胞培养箱 37℃ 孵育 15-20 分钟。
d. 37℃ 孵育结束后,500×g 4℃ 离心 3-4 分钟,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
e. 用 PBS 洗涤 2 次:加入 2 mL PBS 重悬细胞,500×g 4℃ 离心 3-4 分钟,沉淀细胞,弃上清。重复洗 1 次。
f. 再用 500 μL 的 PBS 重悬细胞,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计或流式细胞仪分析 (绿色荧光:Ex/Em=510/527 nm;红色荧光:Ex/Em=585/590 nm)。
2) 贴壁细胞:
注:若用荧光分光光度计或流式细胞仪检测贴壁细胞,可先对贴壁细胞进行消化、收集,重悬后参考悬浮细胞的检测方法。若用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜检测,方法如下:
a. 以 6 孔板为例,每孔加入 1 mL 细胞培养基。
b. 阳性对照的设置:取适量 CCCP (50 mM) 恢复至室温,阳性对照孔培养基中加入 1 μL,其终浓度为 50 μM,轻摇混匀,细胞培养箱 37℃ 孵育 5 分钟。
c. 取适量 JC-1 (3 mM) 恢复至室温,每孔培养基中加入 5 μL JC-1 (3 mM),其终浓度为 15 μM,轻摇混匀,细胞培养箱 37℃ 孵育 15-20 分钟。
d. 37℃ 孵育结束后, 吸除上清,用 PBS 洗涤 2 次。
e. 加入 500 μL PBS,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察 (绿色荧光:Ex/Em=510/527 nm;红色荧光:Ex/Em=585/590 nm)。
-20°C 避光保存,可稳定保存 12 个月。使用时避免重复冻融循环。如需即时使用,可在 2-8°C 下储存。
注意事项
1. 根据实际用量取用 JC-1 (3 mM)。未用完的储存液,避光保存,并避免反复冻融。
2. CCCP 为线粒体电子传递链抑制剂,对人体有害,请注意小心防护。
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