线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)  别名：JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit

JC-1线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit）是一种以JC-1 为荧光探针，快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化的试剂盒，可以用于早期的细胞凋亡检测，也是用来检测细胞早期凋亡的常用方法。

本试剂盒提供了CCCP 作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。对于六孔板中的样品，本试剂盒共可以检测100 个样品；对于12 孔中的样品，本试剂盒共可以检测200 个样品。

操作说明

1) 悬浮细胞：
a. 以 6 孔板为例，每孔用 1 mL 培养基重悬 100 万细胞，其他培养器皿以此类推。
b. 阳性对照的设置：取适量 CCCP (50 mM) 恢复至室温，阳性对照孔培养基中加入 1 μL，其终浓度为 50 μM，细胞培养箱 37℃ 孵育 5 分钟。
c. 取适量 JC-1 (3 mM) 恢复至室温，每孔培养基中加入 5 μL JC-1 (3 mM)，其终浓度为 15 μM，细胞培养箱 37℃ 孵育 15-20 分钟。
d. 37℃ 孵育结束后，500×g 4℃ 离心 3-4 分钟，沉淀细胞。弃上清，注意尽量不要吸除细胞。
e. 用 PBS 洗涤 2 次：加入 2 mL PBS 重悬细胞，500×g 4℃ 离心 3-4 分钟，沉淀细胞，弃上清。重复洗 1 次。
f. 再用 500 μL 的 PBS 重悬细胞，用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察，也可以用荧光分光光度计或流式细胞仪分析 (绿色荧光：Ex/Em=510/527 nm；红色荧光：Ex/Em=585/590 nm)。

2) 贴壁细胞：
注：若用荧光分光光度计或流式细胞仪检测贴壁细胞，可先对贴壁细胞进行消化、收集，重悬后参考悬浮细胞的检测方法。若用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜检测，方法如下：
a. 以 6 孔板为例，每孔加入 1 mL 细胞培养基。
b. 阳性对照的设置：取适量 CCCP (50 mM) 恢复至室温，阳性对照孔培养基中加入 1 μL，其终浓度为 50 μM，轻摇混匀，细胞培养箱 37℃ 孵育 5 分钟。
c. 取适量 JC-1 (3 mM) 恢复至室温，每孔培养基中加入 5 μL JC-1 (3 mM)，其终浓度为 15 μM，轻摇混匀，细胞培养箱 37℃ 孵育 15-20 分钟。
d. 37℃ 孵育结束后， 吸除上清，用 PBS 洗涤 2 次。
e. 加入 500 μL PBS，用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察 (绿色荧光：Ex/Em=510/527 nm；红色荧光：Ex/Em=585/590 nm)。

-20°C 避光保存，可稳定保存 12 个月。使用时避免重复冻融循环。如需即时使用，可在 2-8°C 下储存。

注意事项
1. 根据实际用量取用 JC-1 (3 mM)。未用完的储存液，避光保存，并避免反复冻融。
2. CCCP 为线粒体电子传递链抑制剂，对人体有害，请注意小心防护。

JC-1线粒体膜电位检测试剂盒说明书