Hoechst 33342  别名：bisBenzimide H 33342; HOE 33342

Hoechst 33342是一种可透过细胞膜并对DNA染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光。Hoechst 33342常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33342-DNA的激发和发射波长分别为350 nm和460 nm。

Hoechst 33342使用方法（仅供参考）

1. 将1 mg/mL的Hoechst 33342用PBS或合适的缓冲液制备成10～50 μM Hoechst33342染色液。

2. 固定的细胞或组织染色：

对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst33342染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33342染色。

a）对于贴壁细胞或组织切片：加入适量Hoechst 33342染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。

b）吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。

c）直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350 nm，发射波长460 nm。

3. 活细胞或组织染色：

a）细胞培养物中加入适量Hoechst 33342染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1 mL染色液，对于96孔板一个孔需加入100 μL染色液。

b）在 37℃培养细胞 10～20 分钟。

c）用 PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

d）直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350 nm，发射波长460 nm。

注意事项：

1.Hoechst 33342对人体有一定刺激性，请注意适当防护。

2.荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

3.为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。

4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。