DiO 即 DiOC18(3) 是最常用的细胞膜荧光探针之一，呈现绿色荧光。DiO在进入细胞膜之前荧光非常弱，仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。
别名：DiOC18(3)
DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色，这类染料在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。它们的荧光颜色区分明显：DiI(橙色荧光)，DiO(绿色荧光)，DiD(红色荧光)和 DiR (深红色荧光)这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分别用标准的 FITC和TRITC的滤光片。DiO被激发后 可以发出绿色的荧光，其中最大激发波长为484nm，最大发射波长为501nm。用于细胞膜荧光标记时，DiO的常用浓度为1-30μM，最常用的浓度为5-10μM。DiO可以直接染色活的细胞或组织，染色时间通常为5-20分钟。对于固定的细胞或组织，通常宜使用配制在PBS中的4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。
使用方法（仅供参考）
1、染色液制备
1.1、配置DMSO或Ethanol储存液：储存液用DMSO或Ethanol配置浓度1～2 mM。
注：a、未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，可稳定保存6个月。
b、发现较难溶解时可以适当加热，并用超声处理以促进溶解。
c、必须保证所用溶剂新鲜无水。
1.2、工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。
注：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。
2、悬浮细胞染色
2.1、加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。
2.2、37℃孵育细胞2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以2 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
2.3、孵育结束，按1000～1500 rpm离心5 min。
2.4、倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
2.5、重复2.3，2.4步骤两次以上。
3、贴壁细胞的染色
3.1、将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
3.2、从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
3.3、在盖玻片的一角加入100 μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
3.4、37℃孵育细胞 2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
3.5、吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10 min，然后吸干培养基。
4. 显微镜检测
DiO染色可见绿色荧光。Ex/Em=484/501 nm，推荐滤光器 XF23-Omega, 31001-Chroma。
ACS Nano. 2023 Sep 12;17(17):16770-16786.
Front Bioeng Biotechnol. 2023 Feb 21;11:1098172.
| 分子量 | 881.72 |
| 分子式 | C53H85ClN2O6 |
| CAS号 | 34215-57-1 |
| 溶解性（25°C） | DMF 5 mg/mL Soluble in DMSO Soluble in Ethanol |
| 储存条件 | 4°C, protect from light, dry, sealed |
| 运输方式 | 冰袋运输，根据产品的不同，可能会有相应调整。 |
*下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前，需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。
| Concentration / Solvent Volume / Mass | 1 mg | 5 mg | 10 mg |
|---|---|---|---|
| 1 mM | 1.1341 mL | 5.6707 mL | 11.3415 mL |
| 5 mM | 0.2268 mL | 1.1341 mL | 2.2683 mL |
| 10 mM | 0.1134 mL | 0.5671 mL | 1.1341 mL |
| 小鼠 | 大鼠 | 兔 | 豚鼠 | 仓鼠 | 狗 | |
| 重量 (kg) | 0.02 | 0.15 | 1.8 | 0.4 | 0.08 | 10 |
| 体表面积 (m2) | 0.007 | 0.025 | 0.15 | 0.05 | 0.02 | 0.5 |
| Km 系数 | 3 | 6 | 12 | 8 | 5 | 20 |
| 动物 A (mg/kg) = 动物 B (mg/kg) × | 动物 B的Km系数 |
| 动物 A的Km系数 |
例如，依据体表面积折算法，将化合物用于小鼠的剂量20 mg/kg 换算成大鼠的剂量，需要将20 mg/kg 乘以小鼠的Km系数（3），再除以大鼠的Km系数（6），得到化合物用于大鼠的等效剂量为10 mg/kg。
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