DiD perchlorate 是一种亲脂性花青染料。DiD（红色荧光）可以用来对活细胞进行成像和流式分析。
别名：DiD
DiD perchlorate 是一种亲脂性花青染料。DiD（红色荧光）可以用来对活细胞进行成像和流式分析。DiD可以用633 nm He–Ne 激光器激发，有着比 DiI 更长的激发波长和发射波长，在细胞和组织染色中更有价值。
操作说明（仅供参考）
1、染色液制备
1）配置DMSO或EtOH储存液：储存液用DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。
注：未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。
2）工作液制备：用合适的缓冲液（如无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。
注：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内开始最优浓度的摸索。
1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。
2）37 ℃孵育细胞 2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。
4）倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
5）重复3），4）步骤两次以上。
3、贴壁细胞的染色
1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
3）在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
4）37 ℃孵育细胞 2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸干培养基。
4、显微镜检测
DiD染色可见红色荧光。Ex/Em=644/663 nm，推荐滤光器 XF47-Omega, 31023-Chroma。
5、流式细胞仪检测
DiO、DiI、DiD、DiR染色的细胞可以分别用经典的FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测。
| 分子量 | 959.90 |
| 分子式 | C61H99ClN2O4 |
| CAS号 | 127274-91-3 |
| 溶解性（25°C） | DMSO 5 mM Ethanol 5 mM |
| 储存条件 | -20°C, protect from light, dry, sealed |
| 运输方式 | 冰袋运输，根据产品的不同，可能会有相应调整。 |
*下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前，需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。
| Concentration / Solvent Volume / Mass | 1 mg | 5 mg | 10 mg |
|---|---|---|---|
| 1 mM | 1.0418 mL | 5.2089 mL | 10.4178 mL |
| 5 mM | 0.2084 mL | 1.0418 mL | 2.0836 mL |
| 10 mM | 0.1042 mL | 0.5209 mL | 1.0418 mL |
| 小鼠 | 大鼠 | 兔 | 豚鼠 | 仓鼠 | 狗 | |
| 重量 (kg) | 0.02 | 0.15 | 1.8 | 0.4 | 0.08 | 10 |
| 体表面积 (m2) | 0.007 | 0.025 | 0.15 | 0.05 | 0.02 | 0.5 |
| Km 系数 | 3 | 6 | 12 | 8 | 5 | 20 |
| 动物 A (mg/kg) = 动物 B (mg/kg) × | 动物 B的Km系数 |
| 动物 A的Km系数 |
例如，依据体表面积折算法，将化合物用于小鼠的剂量20 mg/kg 换算成大鼠的剂量，需要将20 mg/kg 乘以小鼠的Km系数（3），再除以大鼠的Km系数（6），得到化合物用于大鼠的等效剂量为10 mg/kg。
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