重组DNA拓扑异构酶I (E.coli) 是将TopA基因在大肠杆菌中进行表达后,经多次纯化分离而得到的。完整的DNA拓扑异构酶I(DNA Topoisomerase I)全酶是一分子量97kDa的蛋白。
DNA拓扑异构酶I催化4种反应:
1)催化负超螺旋DNA的松弛。
2)在单链环状DNA分子内形成绳结(Knotting)和解开绳结(Unknotting)。
3)催化具有互补碱基序列的环状单链DNA形成双链闭环状DNA分子。
4)2个环状双链DNA分子之中的一个存在DNA链的切口时,发生两个分子的连结反应(Catenation)或者逆反应(Decatenation)。
活性定义
25μl反应体系,在37℃条件下反应 15分钟,能催化>95% 的0.5μg pUC19 RF I型(负超螺旋)DNA的解旋所需要的酶量定义为一个单位。DNA超螺旋化通过不含EB的琼脂糖凝胶电泳来检测。
质量控制
SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带,PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。
保存条件
-20°C
注意事项
pUC19 RF I型DNA用DNA拓扑异构酶I处理后进行琼脂糖凝胶电泳时,如果胶中含有EB染料,反应前后DNA条带位置不发生改变。这是由经过DNA拓扑异构酶I的作用转换为松弛型的DNA受EB影响,再次变为超螺旋状态造成的。因此使用DNA拓扑异构酶I作用后,先用不含EB染料的胶先进行电泳,再用EB染色。
建议您制定动物给药及实验方案时,尽量参考已发表的相关实验文献(溶剂种类及配比众多,简单地溶解目的化合物,并不能解决动物给药依从性、体内生物利用度、组织分布等相关问题,未必能保证目的化合物在动物体内充分发挥生物学效用)。
体内实验的工作液,建议您现用现配,当天使用;如在配制过程中出现沉淀、析出现象,可以通过超声和(或)加热的方式助溶。
切勿一次性将产品全部溶解。
请在下面的计算器中,输入您的动物实验相关数据并点击计算,即可得到该实验的总需药量和工作液终浓度。
例如您给药剂量是10 mg/kg,平均每只动物的体重为20 g,每只动物的给药体积是100 μL,动物数量为20只,则该动物实验的总需药量为4 mg,工作液终浓度为2 mg/mL。
1:鉴于实验过程的损耗,建议您至少多配1-2只动物的量;
2:为该产品最终给药时的浓度。