鬼笔环肽-四甲基罗丹明是一种橙色荧光探针(ex/em = 546/575 nm),可选择性地与F-肌动蛋白结合。它可用于定位活体或固定细胞中的肌动蛋白丝,也可用于在体外观察单个肌动蛋白丝。
Int J Mol Sci. 2025 Feb 18;26(4):1725.
Aflatoxin B1 Exposure Suppresses the Migration of Dendritic Cells by Reshaping the Cytoskeleton
分子量 | 1201.3 |
分子式 | C60H70N11O14S |
中文名称 | 鬼笔环肽-四甲基罗丹明 |
溶解性 | DMSO |
储存条件 | -20°C, protect from light |
运输方式 | 冰袋运输,根据产品的不同,可能会有相应调整。 |
鬼笔环肽-四甲基罗丹明是一种橙色荧光探针(ex/em = 546/575 nm),可选择性地与F-肌动蛋白结合。它可用于定位活体或固定细胞中的肌动蛋白丝,也可用于在体外观察单个肌动蛋白丝。
概述
在微孔板孔中制备样品
从板中的样品中取出液体
添加鬼笔环肽-罗丹明标记溶液(100μL/孔)
在室温下染色细胞20至90分钟
清洗细胞在显微镜下观察样品
注意:将小瓶加热至室温并在打开前短暂离心。
操作步骤
1.将 1 μL 的鬼笔环肽-四甲基罗丹明缀合溶液添加到 1 mL 含 1% BSA的PBS 中。
注意1:鬼笔环肽缀合物未使用的储备溶液应等分并储存在-20℃,避光。
注意2:不同的细胞类型可能染色不同。鬼笔环肽缀合物工作溶液的浓度的制备需要根据实际而定。
2.染色细胞:
2.1执行甲醛固定,在室温下将含3.0-4.0%甲醛的细胞在PBS中孵育10-30分钟。
注意:避免使用任何含甲醇的固定剂,因为甲醇会在固定过程中破坏肌动蛋白。 优选的固定剂是不含甲醇的甲醛。
2.2用PBS冲洗固定细胞2-3次。
2.3可选:在PBS中加入0.1%Triton X-100固定细胞3至5分钟,以增加渗透性。 用PBS冲洗细胞2-3次。
2.4将100μL/孔(96孔板)鬼笔环肽缀合物工作溶液加入固定的细胞中,并在室温下染色细胞20至90分钟。
2.5在加上盖玻片之前,用PBS轻轻冲洗细胞2至3次以除去过量的鬼笔环肽缀合物,然后在显微镜下进行,密封和成像。
下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前,需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。
浓度/溶剂体积/质量 | 1 mg | 5 mg | 10 mg |
---|---|---|---|
1 mM | 0.8324 mL | 4.1622 mL | 8.3243 mL |
5 mM | 0.1665 mL | 0.8324 mL | 1.6649 mL |
10 mM | 0.0832 mL | 0.4162 mL | 0.8324 mL |
*吸湿的DMSO对产品的溶解度有显著影响,请使用新开封的DMSO;
请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。
建议您制定动物给药及实验方案时,尽量参考已发表的相关实验文献(溶剂种类及配比众多,简单地溶解目的化合物,并不能解决动物给药依从性、体内生物利用度、组织分布等相关问题,未必能保证目的化合物在动物体内充分发挥生物学效用)。
体内实验的工作液,建议您现用现配,当天使用;如在配制过程中出现沉淀、析出现象,可以通过超声和(或)加热的方式助溶。
切勿一次性将产品全部溶解。
请在下面的计算器中,输入您的动物实验相关数据并点击计算,即可得到该实验的总需药量和工作液终浓度。
例如您给药剂量是10 mg/kg,平均每只动物的体重为20 g,每只动物的给药体积是100 μL,动物数量为20只,则该动物实验的总需药量为4 mg,工作液终浓度为2 mg/mL。
1:鉴于实验过程的损耗,建议您至少多配1-2只动物的量;
2:为该产品最终给药时的浓度。