
JC-1 是一种荧光亲脂性羰花青染料,广泛用于测量线粒体膜电位。JC-1 染料以电势依赖性的方式积聚在线粒体内,可以用来检测细胞或纯化的线粒体膜电位。正常线粒体内,JC-1 聚集在线粒体基质中形成聚合物,聚合物发出强烈的红色荧光 (Ex=585 nm, Em=590 nm) ;在线粒体膜电位较低时,JC-1不能聚集在线粒体的基质中,产生绿色荧光 (Ex=510 nm, Em=527 nm) 。
J Colloid Interface Sci. 2025 Oct 17.
Int Immunopharmacol. 2023 Sep 21;124(Pt B):110963.
Life Sci. 2021 Jan 15;265:118853.
| 分子量 | 652.23 |
| 分子式 | C25H27Cl4IN4 |
| SMILES | CCN1C2=CC(=C(C=C2[N+](=C1C=CC=C3N(C4=CC(=C(C=C4N3CC)Cl)Cl)CC)CC)Cl)Cl.[I-] |
| CAS号 | 3520-43-2 |
| 中文名称 | JC-1线粒体膜电位探针 |
| 溶解性(仅列举部分溶剂) | DMSO ≥ 10 mg/mL |
| 储存条件 | -20°C, protect from light, dry, sealed |
| 运输方式 | 冰袋运输,根据产品的不同,可能会有相应调整。 |
*不同实验中用到的溶剂可能不同,具体实验所需溶剂及溶解方法请参考相关文献描述。
JC-1 是一种荧光亲脂性羰花青染料,广泛用于测量线粒体膜电位。JC-1 染料以电势依赖性的方式积聚在线粒体内,可以用来检测细胞或纯化的线粒体膜电位。正常线粒体内,JC-1 聚集在线粒体基质中形成聚合物,聚合物发出强烈的红色荧光 (Ex=585 nm, Em=590 nm) ;在线粒体膜电位较低时,JC-1不能聚集在线粒体的基质中,产生绿色荧光 (Ex=510 nm, Em=527 nm) 。
使用参考:
JC-1 染色液的配制:
1.1 制备储存液
用 DMSO 配制 5 mg/mL 的 JC-1。如用 1 mL DMSO 溶解 5 mg JC-1 粉末。
注:1) JC-1 储存液建议分装后于 -20℃ 或 -80℃ 避光保存。
1.2 工作液的配制
按照 0.1% DMSO + 89.9% ddH2O + 10% 10x PBS 依次稀释,配制成 1-5 μg/mL 的 JC-1 工作液。以 1 mL 的 5 μg/mL 的工作液为例,从 5 mg/mL 的 JC-1 储存液中取出 1 μL 至管中,加入 899 μL ddH2O 充分混匀,再向上述体系中加入 100 μL 10x PBS 充分混匀。
注:1) JC-1染料需要即配即用,放置一段时间可能会析出;尽量在避光条件下配制使用;
2) 依次稀释的每一步都要充分混匀至澄清,必要时可以辅助 37℃ 超声助溶;
3) 请不要直接使用 1x PBS 或无血清的培养基稀释至工作液,否则会导致严重析出;
4) 如果 JC-1 进入细胞的效果不好,可向工作液中加入适量 20% Pluronic F127 溶液,终浓度为 0.02-0.05%,Pluronic F127 可以防止 JC-1 在缓冲液中聚合并帮助其进入细胞。
JC-1 染色:
1) 以 6 孔板为例进行细胞铺板,密度为 5×105 cells/mL。37℃,5% CO2 培养箱培养过夜。
注:进行凋亡诱导时的细胞密度建议不超过 1×106/mL,也可根据自己的细胞类型培养至合适的密度。
2) 取 0.5 mL 细胞悬液至无菌的离心管内。
3) 400 g 离心 3-5 min;弃上清。
4) 用 1 mL JC-1 工作液重悬细胞,于 37℃,5% CO2 培养箱孵育 15-30 min。
5) 室温条件 400 g 离心 5 min;吸掉上清。
6) 用 2 mL 细胞培养液或者缓冲液重悬细胞,之后室温条件 400 g 离心 5 min;弃上清,重复两次。
7) 用 1 mL 新鲜培养液或者缓冲液重悬细胞,立刻进行后续的流式分析或荧光显微镜观察。
8) 数据分析 (流式细胞仪) :含有红色 JC-1 聚集物的健康细胞线粒体用 FL2 通道检测;含有绿色 JC-1 单体的凋亡或不健康细胞用 FL1 (FITC) 通道检测。
注:若用于酶标仪检测,用 300 μL 缓冲液重悬细胞;然后按照每孔 100 μL 的量将染色好的细胞转移到不透光的 96 孔板内,即可进行荧光酶标板分析。
下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前,需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。
| 浓度/溶剂体积/质量 | 1 mg | 5 mg | 10 mg |
|---|---|---|---|
| 1 mM | 1.5332 mL | 7.666 mL | 15.332 mL |
| 5 mM | 0.3066 mL | 1.5332 mL | 3.0664 mL |
| 10 mM | 0.1533 mL | 0.7666 mL | 1.5332 mL |
*吸湿的DMSO对产品的溶解度有显著影响,请使用新开封的DMSO;
请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。
建议您制定动物给药及实验方案时,尽量参考已发表的相关实验文献(溶剂种类及配比众多,简单地溶解目的化合物,并不能解决动物给药依从性、体内生物利用度、组织分布等相关问题,未必能保证目的化合物在动物体内充分发挥生物学效用)。
体内实验的工作液,建议您现用现配,当天使用;如在配制过程中出现沉淀、析出现象,可以通过超声和(或)加热的方式助溶。
切勿一次性将产品全部溶解。
请在下面的计算器中,输入您的动物实验相关数据并点击计算,即可得到该实验的总需药量和工作液终浓度。
例如您给药剂量是10 mg/kg,平均每只动物的体重为20 g,每只动物的给药体积是100 μL,动物数量为20只,则该动物实验的总需药量为4 mg,工作液终浓度为2 mg/mL。
1:鉴于实验过程的损耗,建议您至少多配1-2只动物的量;
2:为该产品最终给药时的浓度。
荧光染料是线粒体成像的重要工具,用于实时监测线粒体状态和代谢活动。JC-1(AbMole,M9724)是一种亲脂性阳离子荧光染料,常用于分析细胞线粒体中的膜电位(MMP,ΔΨ)变化。线粒体膜电位是由电子传递链将质子从线粒体基质泵至膜间隙产生的跨膜电势差。线粒体膜电位可反映线粒体功能的异常,例如线粒体起始的早期凋亡常伴随着膜电位的去极化(膜电位降低),因此JC-1(AbMole,M10454)也可以用于分析细胞凋亡状态。当ΔΨ位于高电位状态时,JC-1在线粒体基质内形成聚集体(J-aggregates),发射红色荧光(峰值约590 nm);反之当膜电位降低时,JC-1以单体形式存在,发射绿色荧光(峰值约527nm)。可通过荧光显微镜、激光扫描共聚焦显微镜等技术手段进行观测,或通过流式细胞术量化分析红绿荧光强度比值,检测线粒体膜电位的变化。
图 1. 线粒体膜电位的产生机制和工作原理
以上参考文献由AI整理,仅供参考,AbMole 尚未独立确认这些文献的准确性。