Fluo-8 AM 是一种钙荧光探针,可以加载到原生质体中检测组织细胞中的钙。最大激发/发射波长为495nm/516nm,需-15℃以下避光保存。Fluo-8 AM 是目前最亮的可见光激发波长Ca2+荧光探针,具有细胞膜渗透性,只需简单培养,即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内,即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fluo-8,从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。
Fluo-8 AM 是一种钙荧光探针,可以加载到原生质体中检测组织细胞中的钙。最大激发/发射波长为495nm/516nm,需-15℃以下避光保存。Fluo-8 AM 是目前最亮的可见光激发波长Ca2+荧光探针,具有细胞膜渗透性,只需简单培养,即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内,即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fluo-8,从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。
使用说明(仅供参考)
1、储备溶液配制
Fluo-8 AM 在高质量无水 DMSO (M49899) 中制备 2 至 5 mM Fluo-8 AM 储备溶液。
2、工作溶液配制
在实验当天,将 Fluo-8 AM 溶解在 DMSO 中或将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。使用 0.04% Pluronic F-127 在您选择的缓冲液(例如 Hanks 和 Hepes 缓冲液)中制备 2 至 20 µM 的染料工作溶液。对于大多数细胞系,建议使用终浓度为 4-5 μM 的 Fluo-8 AM。必须根据经验确定细胞加载所需的确切指示剂浓度。
注意:非离子洗涤剂 Pluronic F-127 (M3825) 有时用于增加 Fluo-8 AM 的水溶性,防止Fluo-8 AM在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。可以从AbMole进行购买。
注意:如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白,则可将丙磺舒 (1-2 mM) 添加到染料工作溶液中(孔中的终浓度为 0.5-1 mM)以减少去酯化指示剂的泄漏。丙磺舒偏碱性,因此加入培养基后可能需要重新调整pH。
3、操作步骤
1) 在生长培养基中制备细胞过夜。
2) 第二天,将 1X Fluo-8 AM 工作溶液添加到您的细胞板中。
注意:如果您的化合物会干扰血清,请在加载染料之前用新鲜的 HHBS 缓冲液替换生长培养基。
3) 在 37°C 的细胞培养箱中孵育 30 到 60 分钟。
注意:将染料孵育 2 小时以上可以提高某些细胞系的信号强度。
4) 用 HHBS 或您选择的缓冲液(含有阴离子转运蛋白抑制剂,如 1 mM 丙磺舒)替换染料工作溶液,以去除任何多余的探针。
5) 根据需要添加刺激物,并使用配备有 FITC 滤光片组的荧光显微镜或 FDSS、FLIPR 或 FlexStation的荧光板读取器在 490/525 nm 截止波长 515 nm 处检测荧光。
Univerzita Karlova. 2023.
Fyziologická funkčnost preptinu a jeho analogů Physiological functioning of preptin and its analogs
分子量 | 1046.93 |
分子式 | C50H50N2O23 |
CAS号 | 1345980-40-6 |
溶解性(25°C) | DMSO 15 mg/mL |
储存条件 | -15°C, protect from light |
运输方式 | 冰袋运输,根据产品的不同,可能会有相应调整。 |
*下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前,需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。
Concentration / Solvent Volume / Mass | 1 mg | 5 mg | 10 mg |
---|---|---|---|
1 mM | 0.9552 mL | 4.7759 mL | 9.5517 mL |
5 mM | 0.191 mL | 0.9552 mL | 1.9103 mL |
10 mM | 0.0955 mL | 0.4776 mL | 0.9552 mL |
小鼠 | 大鼠 | 兔 | 豚鼠 | 仓鼠 | 狗 | |
重量 (kg) | 0.02 | 0.15 | 1.8 | 0.4 | 0.08 | 10 |
体表面积 (m2) | 0.007 | 0.025 | 0.15 | 0.05 | 0.02 | 0.5 |
Km 系数 | 3 | 6 | 12 | 8 | 5 | 20 |
动物 A (mg/kg) = 动物 B (mg/kg) × | 动物 B的Km系数 |
动物 A的Km系数 |
例如,依据体表面积折算法,将化合物用于小鼠的剂量20 mg/kg 换算成大鼠的剂量,需要将20 mg/kg 乘以小鼠的Km系数(3),再除以大鼠的Km系数(6),得到化合物用于大鼠的等效剂量为10 mg/kg。
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