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Fluo-8 AM 钙荧光探针FLUO-8, AM

目录号 M15051 所有产品仅供科研使用,严禁用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务  


Fluo-8 AM 是一种钙荧光探针,可以加载到原生质体中检测组织细胞中的钙。最大激发/发射波长为495nm/516nm,需-15℃以下避光保存。Fluo-8 AM 是目前最亮的可见光激发波长Ca2+荧光探针,具有细胞膜渗透性,只需简单培养,即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内,即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fluo-8,从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。

Fluo-8 AM 结构式
规格 价格 库存状态
50ug ¥ 1200 中国库存现货
250ug ¥ 2880 中国库存现货
1mg ¥ 7200 中国库存现货
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质量标准及产品资料
生物活性

Fluo-8 AM 是一种钙荧光探针,可以加载到原生质体中检测组织细胞中的钙。最大激发/发射波长为495nm/516nm,需-15℃以下避光保存。Fluo-8 AM 是目前最亮的可见光激发波长Ca2+荧光探针,具有细胞膜渗透性,只需简单培养,即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内,即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fluo-8,从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。


使用说明(仅供参考)

1、储备溶液配制

Fluo-8 AM 在高质量无水 DMSO (M49899) 中制备 2 至 5 mM Fluo-8 AM 储备溶液。


2、工作溶液配制

在实验当天,将 Fluo-8 AM 溶解在 DMSO 中或将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。使用 0.04% Pluronic F-127 在您选择的缓冲液(例如 Hanks 和 Hepes 缓冲液)中制备 2 至 20 µM 的染料工作溶液。对于大多数细胞系,建议使用终浓度为 4-5 μM 的 Fluo-8 AM。必须根据经验确定细胞加载所需的确切指示剂浓度。

注意:非离子洗涤剂 Pluronic F-127 (M3825) 有时用于增加 Fluo-8 AM 的水溶性,防止Fluo-8 AM在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。可以从AbMole进行购买。

注意:如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白,则可将丙磺舒 (1-2 mM) 添加到染料工作溶液中(孔中的终浓度为 0.5-1 mM)以减少去酯化指示剂的泄漏。丙磺舒偏碱性,因此加入培养基后可能需要重新调整pH。


3、操作步骤

1) 在生长培养基中制备细胞过夜。

2) 第二天,将 1X Fluo-8 AM 工作溶液添加到您的细胞板中。

注意:如果您的化合物会干扰血清,请在加载染料之前用新鲜的 HHBS 缓冲液替换生长培养基。

3) 在 37°C 的细胞培养箱中孵育 30 到 60 分钟。

注意:将染料孵育 2 小时以上可以提高某些细胞系的信号强度。

4) 用 HHBS 或您选择的缓冲液(含有阴离子转运蛋白抑制剂,如 1 mM 丙磺舒)替换染料工作溶液,以去除任何多余的探针。

5) 根据需要添加刺激物,并使用配备有 FITC 滤光片组的荧光显微镜或 FDSS、FLIPR 或 FlexStation的荧光板读取器在 490/525 nm 截止波长 515 nm 处检测荧光。


使用AbMole产品发表的文献
化学性质
分子量 1046.93
分子式 C50H50N2O23
CAS号 1345980-40-6
溶解性(25°C) DMSO 15 mg/mL
储存条件 -15°C, protect from light
运输方式 冰袋运输,根据产品的不同,可能会有相应调整。
储备液配制

*下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前,需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。

Concentration / Solvent Volume / Mass 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.9552 mL 4.7759 mL 9.5517 mL
5 mM 0.191 mL 0.9552 mL 1.9103 mL
10 mM 0.0955 mL 0.4776 mL 0.9552 mL
溶液配置摩尔浓度计算器
质量   浓度   体积   分子量*  
 =   x   x 
不同实验动物依据体表面积的等效剂量转换表(参考来源于公开文献
小鼠 大鼠 豚鼠 仓鼠
重量 (kg) 0.02 0.15 1.8 0.4 0.08 10
体表面积 (m2) 0.007 0.025 0.15 0.05 0.02 0.5
Km 系数 3 6 12 8 5 20
动物 A (mg/kg) = 动物 B (mg/kg) ×  动物 B的Km系数
动物 A的Km系数

例如,依据体表面积折算法,将化合物用于小鼠的剂量20 mg/kg 换算成大鼠的剂量,需要将20 mg/kg 乘以小鼠的Km系数(3),再除以大鼠的Km系数(6),得到化合物用于大鼠的等效剂量为10 mg/kg。

参考文献

[1] Lina Qiu, et al. Hortic Res. Loading calcium fluorescent probes into protoplasts to detect calcium in the flesh tissue cells of Malus domestica

[2] Thore Schade-Mann, et al. Hear Res. Calcium signaling in interdental cells during the critical developmental period of the mouse cochlea

[3] Andrea E Morrell, et al. Connect Tissue Res. Mechanosensitive Ca 2+ signaling and coordination is diminished in osteocytes of aged mice during ex vivo tibial loading

[4] Sebastian Rhl, et al. Science. ESCRT-dependent membrane repair negatively regulates pyroptosis downstream of GSDMD activation

[5] Noritaka Nakamichi, et al. Biol Pharm Bull. Screening to Identify Multidrug Resistance-Associated Protein Inhibitors with Neuroblastoma-Selective Cytotoxicity

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