Fluo-8 AM  别名：钙荧光探针FLUO-8, AM

Fluo-8 AM 是一种钙荧光探针，可以加载到原生质体中检测组织细胞中的钙。最大激发/发射波长为495nm/516nm，需-15℃以下避光保存。Fluo-8 AM 是目前最亮的可见光激发波长Ca2+荧光探针，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fluo-8，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。

使用说明（仅供参考）

1、储备溶液配制

Fluo-8 AM 在高质量无水 DMSO (M49899) 中制备 2 至 5 mM Fluo-8 AM 储备溶液。

2、工作溶液配制

在实验当天，将 Fluo-8 AM 溶解在 DMSO 中或将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。使用 0.04% Pluronic F-127 在您选择的缓冲液（例如 Hanks 和 Hepes 缓冲液）中制备 2 至 20 µM 的染料工作溶液。对于大多数细胞系，建议使用终浓度为 4-5 μM 的 Fluo-8 AM。必须根据经验确定细胞加载所需的确切指示剂浓度。

注意：非离子洗涤剂 Pluronic F-127 (M3825) 有时用于增加 Fluo-8 AM 的水溶性，防止Fluo-8 AM在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。可以从AbMole进行购买。

注意：如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，则可将丙磺舒 (1-2 mM) 添加到染料工作溶液中（孔中的终浓度为 0.5-1 mM）以减少去酯化指示剂的泄漏。丙磺舒偏碱性，因此加入培养基后可能需要重新调整pH。

3、操作步骤

1) 在生长培养基中制备细胞过夜。

2) 第二天，将 1X Fluo-8 AM 工作溶液添加到您的细胞板中。

注意：如果您的化合物会干扰血清，请在加载染料之前用新鲜的 HHBS 缓冲液替换生长培养基。

3) 在 37°C 的细胞培养箱中孵育 30 到 60 分钟。

注意：将染料孵育 2 小时以上可以提高某些细胞系的信号强度。

4) 用 HHBS 或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如 1 mM 丙磺舒）替换染料工作溶液，以去除任何多余的探针。

5) 根据需要添加刺激物，并使用配备有 FITC 滤光片组的荧光显微镜或 FDSS、FLIPR 或 FlexStation的荧光板读取器在 490/525 nm 截止波长 515 nm 处检测荧光。