D-Luciferin potassium salt(D-荧光素钾盐) 是一种荧光素酶的底物,可催化生物发光昆虫产生典型的黄绿光。
体外研究: D-luciferin is the natural substrate of the enzyme luciferase (Luc), that catalyzes the production of the typical yellowgreen light of fireflies.
体内研究: The total signal intensity is plotted against the time after D-luciferin injection to generate a time-intensity curve. In addition to the peak signal, the signals at fixed time points (5, 10, 15, and 20 min) after D-luciferin injection are determined as alternatives to the peak signal.
使用方法
1. 体外生物发光检测
1)用无菌蒸馏水溶解D-荧光素钾盐,配制成15 mg/mL的储存液 (100×) ,混匀后立即使用,或分装于-20℃避光保存,避免反复冻融。
2)用预热好的组织培养基按1:100将储存液稀释至0.15 mg/mL的工作液浓度。
3)去除细胞培养基。
4)待图像分析前,向细胞内添加荧光素工作液,37℃孵育5-10 min,然后进行图像分析。
2. 活体成像分析
1)用无菌的DPBS (w/o Mg2+、Ca2+) 配制15 mg/mL的荧光素的储存液,混匀。
2)用0.22 µm滤膜过滤除菌。分装于-20℃避光保存,避免反复冻融。使用时4℃融化,实验前平衡至室温(避光)。
3)腹腔注射(i.p.)或静脉注射(i.v.),按照150 mg/kg的剂量进行注射。
4)注射入体内10-15 min(待光信号达到最强稳定平台期)后进行成像分析。
注:建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线,从而确定最高信号检测时间和信号平台期。
注意事项
1)注射方式、动物类型以及体重等都会影响信号的发射,因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线,确定最佳信号平台期和最佳的检测时间。
2)如果要进行ATP的检测,尽量避免外源ATP的污染,如操作时戴手套并使用ATP-free的实验耗材,在进行荧光素的溶解时应使用ATP-free无菌水。
3)本品要进行避光操作和保存。储存液过滤除菌后可分装于-20℃或-80℃冻存。
4)在进行D-荧光素钾盐的溶解时,应使用无钙镁离子的DPBS,因钙镁离子可能会抑制荧光素酶的活性,此外镁离子可能会对荧光素的氧化造成影响,从而影响检测。
5)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Cell Res. 2023 Jun;33(6):464-478.
J Transl Med. 2023 Jun 12;21(1):383.
Inhalable CAR-T cell-derived exosomes as paclitaxel carriers for treating lung cancer
Plant Physiol. 2022 Mar 14;kiac112.
Front Bioeng Biotechnol. 2022 Jun 17;10:928169.
分子量 | 318.41 |
分子式 | C11H7KN2O3S2 |
CAS号 | 115144-35-9 |
溶解性(25°C) | Water 25 mg/mL |
储存条件 | -20°C, protect from light, sealed |
运输方式 | 冰袋运输,根据产品的不同,可能会有相应调整。 |
*下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前,需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。
Concentration / Solvent Volume / Mass | 1 mg | 5 mg | 10 mg |
---|---|---|---|
1 mM | 3.1406 mL | 15.703 mL | 31.406 mL |
5 mM | 0.6281 mL | 3.1406 mL | 6.2812 mL |
10 mM | 0.3141 mL | 1.5703 mL | 3.1406 mL |
小鼠 | 大鼠 | 兔 | 豚鼠 | 仓鼠 | 狗 | |
重量 (kg) | 0.02 | 0.15 | 1.8 | 0.4 | 0.08 | 10 |
体表面积 (m2) | 0.007 | 0.025 | 0.15 | 0.05 | 0.02 | 0.5 |
Km 系数 | 3 | 6 | 12 | 8 | 5 | 20 |
动物 A (mg/kg) = 动物 B (mg/kg) × | 动物 B的Km系数 |
动物 A的Km系数 |
例如,依据体表面积折算法,将化合物用于小鼠的剂量20 mg/kg 换算成大鼠的剂量,需要将20 mg/kg 乘以小鼠的Km系数(3),再除以大鼠的Km系数(6),得到化合物用于大鼠的等效剂量为10 mg/kg。
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