Collagenase (Type II)（胶原酶II型）是从溶组织梭状芽胞杆菌发酵而得的一种蛋白酶，可用于肝脏，骨，甲状腺，心脏和唾液腺等组织细胞的分离，同时还可用于构建骨关节炎的动物研究。
胶原酶II型 Collagenase 是从溶组织梭状芽胞杆菌发酵而得的一种蛋白酶，同时还可用于构建骨关节炎的动物研究。
使用方法：
向每管200mg的胶原酶中加入100µL的含Ca2+、Mg2+的HBSS（Hank’s平衡盐溶液，含Ca2+、Mg2+），轻轻旋涡震荡使其充分溶解，制备成2g/ml（即1000×）的储存液。然后用低蛋白结合性的0.22μm的滤膜过滤除菌，分装成小份量，然后于-20℃避光冻存。使用前置于冰上融化，避免反复冻融。建议胶原酶的工作浓度范围50-200U/ml（或0.5-2.5mg/ml），具体使用浓度请根据具体消化对象或参考文献来调整。
一、组织分离
1）用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4mm小片，之后用含钙镁的HBSS缓冲液清洗组织片几次；
2）加足量含钙镁的HBSS缓冲液浸没组织片，之后按照50-200U/ml用量加入适量胶原酶；
3）37℃孵育4-18h，置于水平摇床并且孵育体系加入3mM CaCl2可提高消化效率。
4）将消化好的细胞混合物用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。
5）将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。
6）低速离心，吸掉清洗液。最后用适当的细胞培养液重悬细胞，使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。
二、器官灌注
1）将胶原酶加入37℃预热含钙镁的HBSS缓冲液，使其浓度为50-200U/ml，或根据具体实验体系调整；另加入3mM CaCl2可提高消化效率。
2）按照针对特定器官的预优化频率来进行灌注；
3）将收集到的细胞/组织混合碎片用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。
4）将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。
6）低速离心，吸掉清洗液。最后用适当的细胞培养液重悬细胞，使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。
| 分子量 | 849.45 |
| 分子式 | C60H100N2 |
| CAS号 | 9001-12-1 |
| 溶解性（25°C） | Soluble in aqueous buffers |
| 储存条件 | -20°C, dry, sealed |
| 运输方式 | 冰袋运输，根据产品的不同，可能会有相应调整。 |
*下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前，需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。
| Concentration / Solvent Volume / Mass | 1 mg | 5 mg | 10 mg |
|---|---|---|---|
| 1 mM | 1.1772 mL | 5.8862 mL | 11.7723 mL |
| 5 mM | 0.2354 mL | 1.1772 mL | 2.3545 mL |
| 10 mM | 0.1177 mL | 0.5886 mL | 1.1772 mL |
| 小鼠 | 大鼠 | 兔 | 豚鼠 | 仓鼠 | 狗 | |
| 重量 (kg) | 0.02 | 0.15 | 1.8 | 0.4 | 0.08 | 10 |
| 体表面积 (m2) | 0.007 | 0.025 | 0.15 | 0.05 | 0.02 | 0.5 |
| Km 系数 | 3 | 6 | 12 | 8 | 5 | 20 |
| 动物 A (mg/kg) = 动物 B (mg/kg) × | 动物 B的Km系数 |
| 动物 A的Km系数 |
例如，依据体表面积折算法，将化合物用于小鼠的剂量20 mg/kg 换算成大鼠的剂量，需要将20 mg/kg 乘以小鼠的Km系数（3），再除以大鼠的Km系数（6），得到化合物用于大鼠的等效剂量为10 mg/kg。
[1] Isabel R Orriss, et al. Methods Mol Biol. Rat osteoblast cultures
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