Calcein Red, AM 钙黄绿素红（红色）是用于标记和检测活细胞细胞功能的最流行的荧光探针之一。Calcein Red, AM自身无荧光，具有细胞膜渗透性。一旦进入细胞后，被细胞内酯酶水解为钙黄绿素红（Calcein Red），能与胞内钙离子结合，产生强烈的红色荧光（Ex/Em=560/574），用标准的TRITC/Cy3滤片设置检测。
Calcein Red, AM 钙黄绿素红（红色）是用于标记和检测活细胞细胞功能的最流行的荧光探针之一。Calcein Red, AM自身无荧光，具有细胞膜渗透性。一旦进入细胞后，被细胞内酯酶水解为钙黄绿素红（Calcein Red），能与胞内钙离子结合，产生强烈的红色荧光（Ex/Em=560/574），用标准的TRITC/Cy3滤片设置检测。
Calcein Red AM对湿度非常敏感，粉末保存一定要保持干燥。Calcein Red AM储存液需要分装避光冻存，且必须紧紧密封盖子，干燥保存。Calcein Red AM工作液必须现配现用。
使用方法
A、储存液制备
储存液配制范围可为1～5 mM，具体根据工作浓度来决定，建议提前配制成1000×储存液。若使用的工作液为5μM，那么可配制5mM的储存液，即往1mg Calcein Red AM（Mw：1015.79）内加入196μl细胞培养级别的DMSO即可。储存液需要根据单次用量分装，-20℃避光干燥保存，一定要避免受潮，此种情况下可稳定保存数月.
B、20% Pluronic F-127制备
称取100mg Pluronic F-127粉末中加入500μl DMSO，配制成20%(w) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。
C、染色步骤
1. 大多数实验体系中Calcein Red AM的工作浓度为2-5μM。由于不同细胞系的最佳染色条件不同，初次实验建议做梯度实验，以确定Calcein Red AM的最佳工作浓度，以最低的探针浓度得到最好的荧光结果为筛选原则。
【注意】：有时可添加一定量的非离子表面活性剂如Pluronic F127到Calcein Red AM储存液内来增强其水溶性。制备染色工作液前，取一管Calcein Red AM储存液内加入等体积的20% Pluronic F127，使Pluronic F127的终浓度为0.02%。加入Pluronic F127的Calcein Red AM溶液不可长期保存，需现配现用。
2. 对于贴壁细胞，先用胰酶-EDTA消化细胞，离心收集细胞（1000 rpm，3min）。对于悬浮细胞，直接离心收集细胞。
3. 去上清，用PBS（或者其他缓冲液）清洗细胞2~3次，以充分去除残留的酯酶活性。
4. 用1/10细胞培养基体积的Calcein Red AM染色工作液重悬细胞，37℃孵育20min～1h。
【注意】：1）若细胞自身含有机阴离子转运体，需加入丙磺舒（1-2.5mM）或者苯磺唑酮（0.1-0.25mM）到孵育体系内以降低去酯化的Calcein Red泄露到胞外；
2）降低探针加载温度，可能会减少探针区室化现象。
5. 用PBS（或者其他缓冲液）洗涤细胞两次去除多余染料。 【注意】：如有必要，使用含有机阴离子转运抑制剂的缓冲液来进行细胞清洗；
6. 用含合适滤光片（Ex/Em= 560nm/574nm）的仪器进行检测。
| 分子量 | 1015.79 |
| 溶解性（25°C） | DMSO 1~5mM |
| 储存条件 | -20°C, protect from light, dry, sealed |
| 运输方式 | 冰袋运输，根据产品的不同，可能会有相应调整。 |
*下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前，需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。
| Concentration / Solvent Volume / Mass | 1 mg | 5 mg | 10 mg |
|---|---|---|---|
| 1 mM | 0.9845 mL | 4.9223 mL | 9.8446 mL |
| 5 mM | 0.1969 mL | 0.9845 mL | 1.9689 mL |
| 10 mM | 0.0984 mL | 0.4922 mL | 0.9845 mL |
| 小鼠 | 大鼠 | 兔 | 豚鼠 | 仓鼠 | 狗 | |
| 重量 (kg) | 0.02 | 0.15 | 1.8 | 0.4 | 0.08 | 10 |
| 体表面积 (m2) | 0.007 | 0.025 | 0.15 | 0.05 | 0.02 | 0.5 |
| Km 系数 | 3 | 6 | 12 | 8 | 5 | 20 |
| 动物 A (mg/kg) = 动物 B (mg/kg) × | 动物 B的Km系数 |
| 动物 A的Km系数 |
例如，依据体表面积折算法，将化合物用于小鼠的剂量20 mg/kg 换算成大鼠的剂量，需要将20 mg/kg 乘以小鼠的Km系数（3），再除以大鼠的Km系数（6），得到化合物用于大鼠的等效剂量为10 mg/kg。
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