BCECF-AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料，是最常用的检测细胞内pH的荧光探针。
BCECF-AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料，是最常用的检测细胞内pH的荧光探针。BCECF-AM本身没有荧光，进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成BCECF，从而被滞留在细胞内。BCECF在适当的pH值情况下可以被激发形成绿色荧光。最大激发波长和发射波长因pH的不同而有所不同，最大激发波长在503nm左右，最大发射波长在520nm左右，实际检测时推荐使用的激发波长为488nm，发射波长为535nm。
BCECF-AM不仅被广泛用于哺乳动物细胞的研究，也有报道用于动物组织、植物细胞、细菌和酵母等的细胞内pH水平检测。在有细胞内pH变化的细胞毒性、细胞凋亡、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等过程中BCECF-AM被广泛应用。
用于细胞内pH检测时，常用的BCECF-AM的浓度为1～10μM。
操作说明 (for Human Neutrophil)*
(1) 试剂
1 mM的BCECF-AM/DMSO
HEPES 缓冲液(20 mM HEPES, 153 mM NaCl, 5 mM KCl, 5 mM glucose, pH 7.4)
(2) 操作
① 用HEPES制备细胞悬液，细胞浓度为4×107个/mL。
② 将1mM的BCECF-AM/DMSO溶液加入细胞悬液中 (细胞悬液的1/300体积)，BCECF-AM终浓度为3µM。
③ 在37 ºC培养30分钟。
④ 用HEPES缓冲液清洗细胞3次，制成3×106个/mL的细胞悬液。
⑤ 使用荧光显微镜或带有图像分析系统的激光共聚显微镜检测细胞的荧光强度。
*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。
AMACS Appl Mater Interfaces. 2022 Feb 2;14(4):5033-5052.
| 分子量 | 808.69 |
| 分子式 | C39H36O19 |
| CAS号 | 117464-70-7 |
| 溶解性（25°C） | DMSO |
| 储存条件 | -20°C, dry, protect from light, sealed |
| 运输方式 | 冰袋运输，根据产品的不同，可能会有相应调整。 |
*下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前，需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。
| Concentration / Solvent Volume / Mass | 1 mg | 5 mg | 10 mg |
|---|---|---|---|
| 1 mM | 1.2366 mL | 6.1828 mL | 12.3657 mL |
| 5 mM | 0.2473 mL | 1.2366 mL | 2.4731 mL |
| 10 mM | 0.1237 mL | 0.6183 mL | 1.2366 mL |
| 小鼠 | 大鼠 | 兔 | 豚鼠 | 仓鼠 | 狗 | |
| 重量 (kg) | 0.02 | 0.15 | 1.8 | 0.4 | 0.08 | 10 |
| 体表面积 (m2) | 0.007 | 0.025 | 0.15 | 0.05 | 0.02 | 0.5 |
| Km 系数 | 3 | 6 | 12 | 8 | 5 | 20 |
| 动物 A (mg/kg) = 动物 B (mg/kg) × | 动物 B的Km系数 |
| 动物 A的Km系数 |
例如，依据体表面积折算法，将化合物用于小鼠的剂量20 mg/kg 换算成大鼠的剂量，需要将20 mg/kg 乘以小鼠的Km系数（3），再除以大鼠的Km系数（6），得到化合物用于大鼠的等效剂量为10 mg/kg。
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